基因编辑是对基因组特定基因序列精准修饰以实现分子育种的重要工具。基因编辑技术的快速发展为猪的现代分子育种提供了新途径，显著提高了育种效率。该技术历经三代演进：①锌指核酸酶（zinc finger nuclease， ZFNs）和转录激活因子样效应物核酸酶（transcription activator-like effector nucleases，TALEN）奠定了靶向编辑基础，但存在操作复杂、成本高的缺陷；②成簇规则间隔回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）系统实现突破，其中iGeoCas9通过结构改造将热稳定性与编辑活性提升百倍，小型化Cas蛋白优化递送效率；③碱基编辑器实现单碱基精准转换，引导编辑系统突破类型限制，支持自由碱基转换与小片段修饰。在猪育种中，该技术通过编辑基因改善肉品质、提升生长性能、优化繁殖效率及增强抗病能力，同时还实现了抗寒、环保等创新应用。相较于传统育种，基因编辑技术可缩短周期并保持遗传多样性，但面临编辑效率不足、脱靶风险及产业化壁垒。文章系统综述了基因编辑技术的发展与育种应用，旨在为优化编辑工具性能、建立产业化安全体系提供参考，从而推动技术创新，支撑猪育种技术进步及产业可持续发展。

细胞是构成生物体的基本单位，具有独特的发育轨迹和分子特征。单细胞测序技术作为一种高效的细胞层面遗传信息解析方法，可对基因组、转录组、蛋白质组、代谢组及表观遗传组进行测序，并支持多组学联合测序等整合分析策略，精准捕捉单个细胞的分子特征。该技术突破传统群体细胞研究的局限，已成为解析动物细胞分子调控机制和细胞命运转换轨迹的有力工具，为动物遗传育种研究提供了新视角。文章聚焦于5种单细胞测序技术——单细胞转录组测序技术、单细胞基因组测序技术、单细胞表观基因组测序技术、单细胞蛋白质组学测序技术、单细胞代谢组学测序技术，系统阐述了这些技术的发展历程和原理，并进一步探讨了单细胞测序技术在畜禽遗传育种中的应用研究进展，以期为后续畜禽遗传育种研究提供参考。

在全面禁止向饲料中添加促生长类抗生素的背景下，寻找安全高效的替抗产品是畜牧行业的研究重点，益生菌因其绿色、无公害和效果优良等作用成为焦点。凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans，BC）兼具乳酸菌与芽孢杆菌的双重益生特性，可稳定动物肠道微生态平衡、增强免疫机能并提升饲料利用率；丁酸梭菌（Clostridium butyricum，CB）作为革兰阳性厌氧芽孢杆菌，凭借耐酸、耐碱及耐高温等生物学特性，在调节肠道菌群、短链脂肪酸代谢以及抗炎抗氧化等方面发挥关键作用。笔者简述了两种益生菌的作用，分析了其改善动物生长性能、优化肠道菌群结构及增强免疫功能的联合作用机制；回顾了两种菌在家禽和猪生产中联合使用的应用进展，以期为未来复合益生菌的精准配伍与深度开发提供理论依据。

在鸡的生产过程中，热应激是一个常见的环境问题。鸡的皮肤缺乏汗腺，在高温情况下其体热调节能力有限，严重时会对其生产性能产生负面影响。笔者阐述了高温胁迫下鸡的关键生理与行为响应，包括呼吸频率剧增、体温升高、采食量锐减、饮水量激增；剖析了其深层作用机制，如神经内分泌系统（下丘脑-垂体-肾上腺轴、下丘脑-垂体-性腺轴、下丘脑-垂体-甲状腺轴）的激活与紊乱。由于热应激会对鸡造成一系列的负面影响，损害机体肠道健康、抗氧化能力和免疫性能，并最终影响生产性能、繁殖性能和产品品质。因此，深入了解热应激对鸡体热调节和生产性能的影响，在鸡生产中至关重要。笔者通过综述热应激对鸡体热调节和生产性能的影响机制，以期为鸡健康管理和生产效益提升提供理论依据和实践指导。

桑树作为一种具有重要经济价值、药用价值和生态价值的木本植物，其主要开发利用部位包括桑椹、桑叶、桑枝和桑根皮。这些部位富含黄酮、多糖、多酚、生物碱等活性成分，具有促进生长、降血糖、降血脂、抗炎、增强抗氧化能力和免疫能力、提升肉品质等多种生物学功能。随着科技的快速发展，桑活性成分的提取工艺不断优化，常用的方法包括溶剂浸提、超声辅助萃取和酶辅助萃取。桑树因其活性成分含量高、天然无残留、可再生等优势，在后抗生素时代展现出广阔的应用前景，近年来也逐渐被应用于水产养殖领域。然而，桑树活性物质中单体的作用效果、在不同物种上的使用剂量标准有待明确，桑树资源加工技术的标准化和规模化等问题亟待解决。基于此，笔者综述了桑树资源的分类及其价值、活性成分提取工艺及其对水产动物生长性能、抗氧化、免疫、糖脂代谢和肉品质的影响，以期为新型饲料资源开发和桑树资源饲用化利用提供借鉴与参考。

黄芪秸秆作为黄芪的副产物，其秸秆产量是根产量的十几倍，作为一种兼具营养价值和生物活性的饲料资源，其在反刍动物养殖中的应用受到广泛关注。笔者详细梳理了黄芪秸秆的营养物质含量、生物活性物质组成与含量及其在反刍动物养殖中的应用。黄芪秸秆富含粗蛋白质和矿物质，是优质的粗饲料资源，但不同产地、不同刈割时期黄芪秸秆的营养物质含量存在较大差异。黄芪秸秆含有多糖类、黄酮类和皂苷类等多种生物活性物质，除多糖类外，其他活性物质的含量与黄芪根相近。黄芪秸秆中的生物活性物质可以促进反刍动物的生长和育肥性能、瘤胃发酵功能，改善瘤胃微生物群落结构，提高机体的抗氧化和免疫性能，其在反刍动物养殖中具有广阔的应用前景和重要的现实意义。未来应继续探究黄芪秸秆在反刍动物体内代谢的机制，同时优化其加工利用技术，为黄芪秸秆在畜牧业中的广泛应用提供更加坚实的理论和实践基础。

驼乳因其独特风味和丰富营养而备受青睐。挥发性风味物质是构成其风味特征的关键载体，也是影响驼乳品质与产业发展的核心要素。笔者系统阐述了驼乳中醛、酮、酸、酯类等主要风味化合物的组成与特征；分析了驼乳风味物质通过脂质代谢、蛋白质水解和碳水化合物代谢等途径的形成机制；总结了储藏条件、包装方式、热处理强度、饲料成分、季节因素以及候选基因与调控因子对驼乳风味物质的影响。文章旨在为驼乳资源的高值化开发、特色风味乳制品创新以及驼乳风味与品质的调控提供理论依据。

重组活载体疫苗利用病原体作为载体递送目标抗原，具有免疫效果强、生产成本低、免疫策略灵活等优势，在传染病防控和肿瘤治疗等领域展现出广阔前景。笔者系统综述了细菌和病毒活载体疫苗的研究进展，重点分析了其抗原表达特性、适用动物模型及免疫效果。在细菌载体方面，卡介苗通过基因改造表达结核分枝杆菌抗原或免疫调节因子，可显著提升免疫效果；沙门菌载体因其口服接种便利性在黏膜免疫和癌症治疗中表现突出；乳酸菌作为载体可诱导黏膜和全身免疫。此外，大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等也在抗感染和抗肿瘤疫苗研发中取得进展。病毒载体方面，腺病毒因其高效的转导能力，已成功用于新型冠状病毒肺炎和猪流感疫苗开发；痘病毒因其可容纳大片段外源基因，适用于多价疫苗设计；疱疹病毒宿主范围有限，安全性高，在表达口蹄疫病毒和流感病毒抗原时表现出良好的免疫原性；新城疫病毒和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒等RNA病毒载体因其独特的复制特性成为多病原联苗的理想平台。此外，肠道病毒载体在神经系统疾病治疗中也显示出潜力。尽管活载体疫苗已取得显著成果，但其免疫效率提升、安全性优化及规模化生产仍是未来研究重点。本综述为活载体疫苗的进一步开发和临床应用提供了重要参考。

猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）作为生猪养殖业的高危病原体之一，给全球生猪养殖业造成了重大威胁。由于病毒的高变异性和免疫逃逸特性，对传统疫苗及化学防控药物构成了严峻的挑战。基于中药复方多靶点的协同干预作用，中药已成为当前抗病毒研究领域的热点方向之一。笔者针对中药防控猪流行性腹泻（PED）的国内外研究进展进行了全面综述，对最新中药组方的防控效果和作用机制进行了系统性归纳。同时，结合中药现代化技术，涉及人工智能、网络药理学、中药纳米化、中药益生菌发酵等技术进行中药增效的多途径、多策略的梳理汇总，并展望了中药防治PED的发展方向和应用前景，为PED的防控提供更安全、更有效的中药复合制剂，也为其他动物病毒性疾病的防控提供了参考。

犬黏液瘤性二尖瓣疾病（MMVD）是家犬最常见的心脏病，也是家犬中最常见的心源性死亡原因。二尖瓣的黏液瘤变性主要是其细胞组织学的病变，最主要病变是瓣膜细胞外基质（ECM）的沉积与变性，瓣膜间质细胞（VICs）活化成肌成纤维细胞表型是ECM病变的源头，而VICs的活化有多种机制，包括许多信号分子。在MMVD发病过程中，5-羟色胺（5-HT）通路与瓣膜的物理和化学环境变化有关；转化生长因子-β（TGF-β）通路是控制MMVD发病机制的主要信号通路，且与动物机体内的炎症、机械力和血管紧张素等有关；骨形态发生蛋白（BMP）与动物机体的发育过程有关；活性氧（ROS）参与心肌重塑和心脏衰竭，且能放大TGF-β对MMVD的激活作用；含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS）与瓣膜的结构与功能有关。现阶段已出现MMVD颉颃通路药物的治疗，5-HT受体颉颃剂可减轻VICs的活化和MMVD相关的瓣膜组织的病变，细胞膜修复蛋白MG53、成纤维细胞生长因子等细胞因子可抑制TGF-β信号通路从而治疗MMVD。笔者从MMVD的组织病理学、VICs激活机制及MMVD颉颃通路治疗药物的研究进展三大方面进行论述，以期为该疾病的深入研究和临床治疗提供参考。

体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer， SCNT）技术作为20世纪发育生物学领域的重大突破，其里程碑式成果是首例克隆哺乳动物多利羊的诞生，开创了哺乳动物克隆技术的新纪元。该技术通过将高度分化的体细胞核移植至去核卵母细胞，利用卵胞质重编程能力实现细胞核重编程，最终发育为遗传背景一致的完整个体。笔者系统综述了克隆羊研究的科学历程、关键技术优化及其重要应用价值，重点叙述了供体细胞选择与处理、核移植效率提升策略、表观遗传重编程分子机制及卵母细胞微环境调控等核心科学问题的研究进展，并探讨了该技术在畜牧品种快速扩繁、濒危物种保护、人类疾病模型构建以及治疗性克隆等生物医学领域的应用前景，进一步对未来技术发展方向进行展望，以期为SCNT技术的深入研究与产业化应用提供理论和实践参考。

蜱作为犬类重要的体外寄生虫，可传播多种人兽共患病，如莱姆病和巴贝斯虫病等，对公共卫生构成严重威胁。目前，杀虫剂是防控蜱虫的主要手段，但长期使用导致蜱的抗药性增加，且会带来环境污染问题。因此，亟需开发更安全、有效的防控措施。犬抗蜱疫苗通过特异性抗体干扰蜱的摄食、生殖和附着功能，具有广阔的应用前景。研究发现，多种候选蛋白（如Bm86、ATAQ、SUB、TIM、HK、LIP、FER1、FER2、P0、64TRP、AQP、L7LTU1和GST等）可作为疫苗抗原，通过减少蜱的数量、体重、产卵量等方式降低蜱的繁殖和感染能力。然而，现有抗原对多种蜱的交叉保护效果仍不理想，且在犬中的应用效果尚需进一步验证。未来研究应聚焦于犬的疫苗接种试验，开发更多候选保护抗原，利用疫苗组学和量子疫苗组学等新技术提高疫苗效力，并结合饲养管理、合理使用杀虫剂和抗蜱疫苗，形成综合防控体系。笔者概括了蜱的种类及其对犬和人类健康的危害，回顾了杀虫剂在蜱防控中的应用及其局限性，并重点分析了犬抗蜱疫苗的研究现状。

目的 探究饲粮中添加蓝桉精油（EGO）对热应激肉鸡生长性能、血清生化、抗氧化能力及肠道健康的影响。 方法 选取21日龄体重相近的健康科宝肉公鸡225只，随机分成5组，每组3个重复，每个重复15只。对照组（CON）环境温度全天设置为（24±1）℃，肉鸡饲喂基础饲粮；其余4组肉鸡进行热应激处理，环境温度每日09：00—17：00设置为（32±1）℃，其余时间设置为（24±1）℃，并分别饲喂在基础饲粮中添加0（HS组）、100（HS+EGO-L组）、200（HS+EGO-M组）和300（HS+EGO-H组）mg/kg EGO的饲粮。试验期21 d。试验期间统计生长性能，试验结束时，采集肉鸡翅下静脉血样、肠道组织和盲肠内容物，分别测定血清生化指标、抗氧化指标、肠道组织形态及盲肠微生物菌群。 结果 ①与CON组相比，HS组肉鸡终末体重（FBW）、平均日采食量（ADFI）和平均日增重（ADG）均显著降低（P<0.05），料重比（F/G）显著升高（P<0.05）；血清总胆红素（TBIL）含量和碱性磷酸酶（ALP）活性均显著升高（P<0.05），血清钙和磷水平均显著降低（P<0.05）；血清超氧化物歧化酶（SOD）活性显著降低（P<0.05），丙二醛（MDA）含量显著升高（P<0.05）；十二指肠和空肠绒毛高度（VH）显著降低（P<0.05）；盲肠微生物Simpson指数显著降低（P<0.05），Shannon指数显著升高（P<0.05），Beta多样性改变，厚壁菌门相对丰度增加，拟杆菌门相对丰度降低，厚壁菌门和拟杆菌门的比值（F/B）增加；艾森伯格菌属和丁酸梭菌属菌群存在特异性增殖。②与HS组相比，HS+EGO-M和HS+EGO-H组肉鸡FBW和ADG均显著升高（P<0.05），HS+EGO-H组肉鸡F/G显著降低（P<0.05）；HS+EGO-H组肉鸡血清ALP活性显著降低（P<0.05），HS+EGO-M和HS+EGO-H组血清磷水平显著升高（P<0.05），各EGO组血清钙水平显著升高，MDA含量显著降低（P<0.05）；HS+EGO-L和HS+EGO-M组肉鸡十二指肠、HS+EGO-H组空肠VH均显著增加（P<0.05）；各EGO组肉鸡盲肠中厚壁菌门相对丰度降低，HS+EGO-M和HS+EGO-H组拟杆菌门相对丰度增加，F/B值降低；HS+EGO-H组肉鸡盲肠中Christensenellaceae_R-7_group、粪杆菌属、经黏液真杆菌属和norank_o_RF39存在特异性增殖。③肉鸡盲肠萨特氏菌属、未分类的颤螺旋菌科、埃希氏菌-志贺氏菌属与血清MDA含量呈显著或极显著正相关（P<0.05；P<0.01）；Christensenellaceae_R-7_group、Lachnoclostridium、norank_o_Clostridia_UCG-014、阿克曼氏菌属与血清MDA含量呈显著或极显著负相关（P<0.05；P<0.01）。 结论 在本试验条件下，饲料中添加EGO可以缓解热应激肉鸡肝损伤，提高机体抗氧化能力，缓解热应激引起的氧化应激，改善肠道形态结构和调节肠道菌群平衡，进而提高肉鸡生长性能，且以添加300 mg/kg较为适宜。

目的 试验旨在研究添加甘草粗多糖（GP）对苜蓿青贮品质、抗氧化活性、微生物群落结构及体外瘤胃发酵参数的影响，为利用当地特色中草药活性成分调制优质苜蓿青贮饲料和开发功能性饲草产品提供理论依据和实践参考。 方法 以初花期紫花苜蓿为试验材料，试验分为4个处理组，每组4个重复，分别在紫花苜蓿中添加0（对照组，CK）、0.5%（GP1）、1.0%（GP2）和1.5%（GP3）甘草粗多糖，青贮60 d后分析苜蓿青贮的营养成分、发酵品质、抗氧化活性、微生物群落结构及体外瘤胃发酵参数。 结果 与CK组相比，①添加甘草粗多糖显著提高了苜蓿青贮的干物质（DM）、粗脂肪（EE）、总多糖（TP）含量，乳酸菌（LAB）数量，总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，以及DDPH活性自由基清除率（P<0.05），显著降低了苜蓿青贮pH和酵母菌数量（P<0.05）；GP2和GP3组的可溶性碳水化合物（WSC）、乳酸（LA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性均显著升高（P<0.05）；GP3组的中性洗涤纤维（NDF）和丙酸（PA）含量均显著降低（P<0.05）。②添加甘草粗多糖降低了苜蓿青贮中蓝藻菌门（Cyanobacteria）和未分类蓝藻细菌（unclassified_p_Cyanobacteria）的相对丰度，提高了厚壁菌门（Firmicutes）、蒙氏肠球菌（Enterococcus mundtii）、乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）和植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）的相对丰度；GP2组的旧金山果乳杆菌（Fructilactobacillus sanfranciscensis）的相对丰度明显提高；GP1和GP3组的马胃葡萄球菌（Staphylococcus equorum）和表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）的相对丰度明显提高。相关性分析结果显示，未分类蓝藻细菌相对丰度与pH和酵母菌数目呈显著正相关（P<0.05），而与LA含量和LAB数量呈显著负相关（P<0.05）。植物乳杆菌相对丰度与酵母菌数目呈显著负相关（P<0.05）。③添加甘草粗多糖显著提高了苜蓿青贮的体外干物质消化率（IVDMD）和体外中性洗涤纤维消化率（IVNDFD）（P<0.05）。 结论 本试验条件下，添加甘草粗多糖可提高苜蓿青贮品质、抗氧化活性和体外瘤胃发酵参数，并能提高苜蓿青贮有益菌丰度。综合考虑，添加1.0%甘草粗多糖对苜蓿青贮品质的改善效果最佳。

目的 探究不同蛋白质水平饲粮对牦牛生长性能及瘤胃代谢调控的影响，以期为不同蛋白质饲粮水平饲喂牦牛提供理论依据。 方法 选择20头健康状况良好、平均体重（210.60±11.75）kg的牦牛，配方时保持综合净能水平相当（7.73、7.65 MJ/kg），按照不同蛋白质水平（18.88%、12.77%）饲喂分为2组：低蛋白质饲粮组和高蛋白质饲粮组，每组10头牛。试验预饲期20 d，正试期90 d。试验结束后测定牦牛的生长性能及营养物质消化率，并采集瘤胃液后进行非靶向代谢组分析。 结果 育肥90 d后，高蛋白质饲粮组牦牛平均日增重极显著高于低蛋白质饲粮组（P<0.01），粗蛋白质和粗灰分消化率显著或极显著高于低蛋白质饲粮组（P<0.05；P<0.01）。气相色谱-质谱联用仪平台对2组共筛选出29个上调差异代谢物和28个下调差异代谢物；液相色谱-质谱联用仪平台共筛选出287个上调差异代谢物和244个下调差异代谢物。分析差异代谢物相关性后发现21对正相关代谢物与18对负相关代谢物；通路富集分析发现苯丙氨酸代谢、酪氨酸代谢、维生素B₆代谢、泛醌和其他萜类醌的生物合成、核黄素代谢富集较显著。 结论 在牦牛饲喂18.88%粗蛋白质、7.65 MJ/kg综合净能条件下，平均日增重极显著高于12.77%蛋白质饲粮组，可有效缩短育肥周期，提高牦牛瘤胃微生物代谢水平。

目的 探讨饲粮中添加不同剂量月桂酸甘油酯（GML）对奶牛生长性能、血液生化指标、瘤胃发酵参数及甲烷排放的影响。 方法 选取48头体重接近、健康的7月龄荷斯坦奶牛，随机分为4组，每组12头。依据试验动物每日干物质采食量，在基础饲粮中分别添加0（对照组）、0.6%、1.2%、1.8% GML。预饲期14 d，正试期56 d。在试验第0和50天对奶牛进行称重，计算平均日增重；在第50~54天使用直肠采粪法收集粪样，用于营养物质表观消化率测定；在第0和51天采集瘤胃液，用于瘤胃发酵参数测定；在第52天采集血液，用于血清生化指标测定；在第49~56天采用呼吸面具进行奶牛气体排放速率测定。 结果 ①0.6% GML组奶牛终末体重和平均日增重均显著低于其他组（P<0.05）。0.6%和1.8%组奶牛中性洗涤纤维表观消化率显著低于对照组及1.2% GML组（P<0.05）；1.2% GML组酸性洗涤纤维和粗蛋白质表观消化率显著高于其他组（P<0.05）。②奶牛瘤胃液中微生物蛋白含量与pH在各组间均无显著差异（P>0.05）。在试验第51天，奶牛瘤胃液中乙酸、丙酸含量和乙丙比随着GML添加量增加呈显著线性变化（P<0.05）。③奶牛血清中总蛋白、白蛋白、尿素、葡萄糖、甘油三酯、脂肪酶含量在各组间均无显著差异（P>0.05）；1.2% GML组白球比和总胆固醇含量显著高于其他组（P<0.05）。④通过呼吸面具测定，0.6% GML组奶牛甲烷和二氧化碳排放速率较对照组显示出轻微降低趋势，而1.2%和1.8% GML组则表现出略高的排放速率，但各组间均无显著差异（P>0.05）。 结论 饲粮中添加0.6% GML具有一定的减排效果，可降低奶牛甲烷和二氧化碳排放速率，且影响生长性能；而较高剂量GML（1.2%和1.8%）则在改善瘤胃粗蛋白质和酸性纤维利用率及促进日增重方面显示出潜在优势。

目的 探究饲粮中维生素B₆（VB₆）含量对大口黑鲈稚鱼生长性能、生化指标、消化和抗氧化能力的影响，确定大口黑鲈稚鱼对VB₆的适宜需求量，为大口黑鲈稚鱼配合饲料开发提供营养需求量参数和理论依据。 方法 选取2 400尾初始体重为（92.50±0.28）mg的大口黑鲈稚鱼，随机分为6组：P0（对照组）、P1、P2、P3、P4、P5，每组4个重复，每个重复100尾，分别饲喂含3.66、9.89、17.80、31.03、46.36、58.91 mg/kg VB₆的6种配合饲料，养殖周期30 d。试验结束后，测定VB₆对大口黑鲈稚鱼生长性能、生化指标、消化和抗氧化能力的影响，并进行离水应激试验。 结果 P1组大口黑鲈稚鱼的增重率和特定生长率均显著高于P4和P5组（P<0.05），饲料系数无显著差异（P>0.05）。P4组大口黑鲈稚鱼的粗蛋白质含量显著高于P2组（P<0.05），粗脂肪含量显著低于P0、P1和P3组（P<0.05）。各组间大口黑鲈稚鱼内脏团中葡萄糖、甘油三酯含量及谷丙转氨酶活性均无显著差异（P>0.05），P4和P5组谷草转氨酶活性显著高于P0组（P<0.05）；P2、P3及P5组肠道肌层厚度显著小于P0组（P<0.05）；P4和P5组胰蛋白酶和α-淀粉酶活性均显著低于P0组（P<0.05），P1组脂肪酶活性显著高于其他组（P<0.05）。离水胁迫后，P2~P5组大口黑鲈稚鱼存活率显著低于P1组（P<0.05），内脏团中总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性显著低于P0和P1组（P<0.05），过氧化氢酶（CAT）活性显著低于P0组（P<0.05）；P3组丙二醛（MDA）含量显著低于P0组（P<0.05）。与胁迫前相比，胁迫后各组大口黑鲈稚鱼内脏团中T-SOD活性和MDA含量均显著增加（P<0.05），CAT活性仅在P0~P2组显著增加（P<0.05）。 结论 本试验条件下，以增重率为评价指标，折线回归分析得出大口黑鲈稚鱼对饲粮中VB₆需求量为5.34 mg/kg；以胁迫后存活率为评价指标，饲料中VB₆的最适添加量为9.89 mg/kg。

目的 探讨茶花鸡、藏鸡、丝羽乌骨鸡、济宁百日鸡、汶上芦花鸡和如皋黄鸡6个地方鸡种的蛋品质差异，挖掘其产蛋高峰期的蛋用性能，以期为地方鸡种的品种选育与开发利用提供参考。 方法 选取6个25周龄的地方鸡种各60只，每个品种6个重复，每个重复10只母鸡。在30周龄时采集鲜鸡蛋各45枚，其中30枚用于蛋重、蛋壳强度和哈氏单位等常规指标测定，15枚用于蛋清含水量、蛋黄含水量和蛋黄粗脂肪含量的测定，并进行差异比较、相关性分析及主成分分析（PCA）。 结果 茶花鸡的蛋重和蛋黄重显著低于其他5个品种（P<0.05）；各品种的哈氏单位均为优级，且藏鸡的蛋白高度和哈氏单位最优；丝羽乌骨鸡的蛋壳强度最高为41.90 N；相较于其他5个品种，汶上芦花鸡的蛋壳最厚而蛋清含水量最低（P<0.05）；如皋黄鸡的蛋黄比率最高达29.96%，但其蛋黄的颜色、含水量和粗脂肪均最低。各品种鸡的蛋品质指标的平均变异系数范围为6.40%~7.81%，性状较为稳定。相关性分析显示，蛋白高度与哈氏单位、蛋重与蛋黄重、蛋壳强度与蛋壳厚度等11对指标间存在显著或极显著关联（P<0.05；P<0.01），且蛋白高度与哈氏单位的相关系数最高达0.974。PCA结果显示，藏鸡以蛋白因子（得分1.333）的显著优势成为最优选择；如皋黄鸡虽蛋形因子得分最高为0.626，但蛋白、蛋壳及蛋黄品质较差，综合评分最低。 结论 6个地方鸡种的遗传潜能各异，在蛋重、蛋壳强度、蛋白高度、蛋黄粗脂肪等性状上差异显著，且各指标间存在动态关联，其中藏鸡蛋品质的综合评分最优。

目的 本试验旨在探究不同比例鲜苜蓿与燕麦干草混合青贮对发酵品质及瘤胃体外发酵特性的影响。 方法 将鲜苜蓿和燕麦干草按鲜重比为8︰2（AO1）、7︰3（AO2）、6︰4（AO3）均匀混合后青贮60 d，通过感官评分、测定营养成分、发酵品质、有氧稳定性以及瘤胃体外发酵参数评价不同比例鲜苜蓿和燕麦干草的青贮效果。 结果 ①AO2组混合青贮感官评分达18.87分，显著高于AO1和AO3组（P<0.05）。②AO1组青贮的粗蛋白质和粗脂肪含量最高，酸性洗涤纤维、灰分和可溶性碳水化合物量最低；各组间青贮的中性洗涤纤维含量无显著差异（P>0.05）；AO1和AO2组的饲草质量分值显著高于AO3组（P<0.05），其中AO1组分值最高，为60.39。有氧稳定性结果显示，AO2组在有氧暴露条件下保持稳定的时间最长，AO3组次之，AO1稳定时间最短，分别为204.5、166.45和133.17 h。③AO1及AO2组混合青贮中乳酸含量均显著高于AO3组（P<0.05）。④AO3组在各时间段的产气量均高于其余处理组；AO1组的干物质降解率和粗蛋白质降解率显著高于AO2和AO3组（P<0.05），且随鲜苜蓿比例降低，混合青贮中性洗涤纤维降解率呈降低趋势（P＝0.07），而各组间酸性洗涤纤维降解率无显著差异（P>0.05）；AO1组的总挥发性脂肪酸、丁酸、氨态氮浓度显著高于AO2及AO3组。 结论 鲜苜蓿与燕麦干草混合比例控制在8︰2和7︰3时青贮发酵品质最优，体外消化率较高。该结果可为东北地区调制鲜苜蓿与燕麦干草混贮饲料提供参考。

目的 本研究旨在探究虾青素（astaxanthin，AST）在热应激条件下对母兔繁殖性能、抗氧化能力及其仔兔生长的影响，并筛选AST的适宜添加量。 方法 选取240只体重相近的2~3胎健康新西兰母兔，随机分为4组，分别为对照组（基础饲粮）、AST5组（基础饲粮+5 mg/kg AST）、AST15组（基础饲粮+15 mg/kg AST）和AST25组（基础饲粮+25 mg/kg AST）。试验自母兔人工授精前6 d开始至产后35 d仔兔断奶结束，共计72 d。试验期间记录兔舍内温度和相对湿度并计算温湿度指数（temperature-humidity index，THI），记录不同时期母兔采食量，测定母兔的繁殖性能，检测血清抗氧化指标及血清雌二醇（estradiol，E₂）、孕酮（progesterone，P）和促乳素（prolactin，PRL）含量，并测定仔兔的生长性能。 结果 试验期间THI≥27.8的热应激天数占比63%（≥50%），达到热应激条件。与对照组相比，①AST25组母兔各时期采食量均显著提高（P<0.05），母兔的受胎率和分娩率均显著提高（P<0.05）；母兔采食量和其余繁殖性能指标在各组间差异不显著（P>0.05）。②AST15和AST25组的母兔血清中丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量显著降低（P<0.05），超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性显著提高（P<0.05），且AST25组血清谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性显著提高（P<0.05）；母兔血清过氧化氢酶（catalase，CAT）活性在各组间无显著差异（P>0.05）。③AST25组母兔妊娠15 d血清E₂含量极显著降低（P<0.01），产后21 d血清PRL含量显著提高（P<0.05）；3个试验组母兔妊娠15 d血清P含量均显著降低（P<0.05）；④AST5组7、14 d窝均仔兔数显著提高（P<0.05），AST15组14 d窝均仔兔数显著提高（P<0.05），AST25组14、21和35 d仔兔窝重和窝均仔兔数均显著提高（P<0.05）；仔兔其他生长性能指标在各组间均无显著差异（P>0.05）。 结论 在本试验热应激条件下，饲粮中添加AST可通过提高抗氧化能力改善母兔的繁殖性能及其仔兔的生长，AST适宜添加量为25 mg/kg。

目的 本试验旨在探究不同水平脂肪粉对海兰褐蛋鸡产蛋性能、蛋品质、血清生化指标和养分表观代谢率的影响，为脂肪粉在蛋鸡饲粮中的应用提供科学依据。 方法 试验选取270只44周龄海兰褐蛋鸡，随机分为3组，每组6个重复，每个重复15只鸡。对照组提供基础饲粮，试验组在基础饲粮中分别添加2%和4%脂肪粉。预饲期1周，试验期为8周。以重复为单位每日记录产蛋数、异常蛋数、蛋重，每周记录耗料量，统计平均日采食量、产蛋率、平均蛋重、料蛋比；48和52周龄时采集鸡蛋和血清测定蛋品质和血清生化指标；52周龄时采集粪便测定养分表观代谢率。 结果 与对照组相比，①2%脂肪粉组49~52周龄蛋鸡的平均日采食量显著提高（P<0.05）。②2%和4%脂肪粉组48周龄蛋鸡的蛋壳厚度显著降低（P<0.05），而52周龄的蛋比重显著提高（P<0.05）。③2%脂肪粉组48周龄蛋鸡血清中碱性磷酸酶活性显著提高（P<0.05），免疫球蛋白A含量显著降低（P<0.05）。④2%脂肪粉组52周龄蛋鸡血清中谷丙转氨酶活性、免疫球蛋白G含量显著提高（P<0.05），免疫球蛋白A含量显著降低（P<0.05）。 结论 添加2%和4%脂肪粉可以显著提高海兰褐蛋鸡采食量和蛋品质，但可能存在抑制脂质代谢的风险。本试验中脂肪粉的建议添加量为2%。

目的 试验以八眉三元猪为研究对象，通过在饲粮中添加不同浓度的黑果枸杞提取物，探究其对猪血脂指标、脂肪组织细胞形态学以及脂质代谢相关因子mRNA和蛋白表达的影响。 方法 选取48头（50±2）日龄、平均体重为（7.83±0.52）kg的八眉三元猪，随机分为4组，每组3个重复，每个重复4头猪，分别饲喂基础饲粮（CON组）和添加5、10、15 g/kg黑果枸杞提取物的饲粮（LE、ME、HE组），试验期42 d，试验结束时，每重复屠宰2头猪，采集血液、腹部皮下和附睾脂肪组织。测定血脂指标；观察脂肪组织细胞形态；检测脂肪组织中脂质代谢相关因子mRNA和蛋白表达水平。 结果 与CON组相比，①LE、ME、HE组猪血清甘油三酯（TG）含量显著降低（P<0.05）；LE组猪血清总胆固醇（TCH）水平显著降低（P<0.05），血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平显著升高（P<0.05）。②ME组猪腹部皮下脂肪组织中脂滴面积显著降低（P<0.05）；附睾脂肪组织中脂滴面积无显著差异（P>0.05）。③LE、ME、HE组猪腹部皮下脂肪和附睾脂肪中脂质合成相关因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、乙酰辅酶A羧化酶1（ACC）、甾醇调节元件结合转录因子1（SREBP1）的mRNA及蛋白表达显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01），脂质分解相关因子肉碱棕榈酰转移酶1（CPT1）、激素敏感性脂肪酶（HSL）的mRNA及蛋白表达显著或极显著上调（P<0.05；P<0.01）。 结论 饲粮中添加黑果枸杞提取物可通过抑制脂质合成相关因子（PPARγ、ACC、SREBP1）的表达，并促进脂质分解相关因子（CPT1、HSL）的表达，从而显著减少八眉三元猪腹部皮下脂肪的脂质沉积，其中以添加10 g/kg效果最佳。

目的 本研究旨在筛选出能高效降解玉米赤霉烯酮（ZEN）的梅花鹿源芽孢杆菌，为鹿科动物饲料中ZEN脱毒提供菌种资源。 方法 采用富集培养、划线分离技术从梅花鹿粪便中分离芽孢杆菌并与ZEN共培养，通过高效液相色谱法（HPLC）检测不同菌株对ZEN的降解率。采用形态学、生理生化和分子生物学方法对菌株进行鉴定。探究时间、温度、培养基初始pH及毒素浓度对菌株降解ZEN效率的影响。通过小鼠灌胃试验评价菌株的安全性。 结果 从梅花鹿粪便中分离出1株ZEN高效降解菌RDY21，该菌在培养72 h时可降解93.83%的ZEN（10 μg/mL）。菌株RDY21可在8%的氯化钠环境中生长，能利用多种糖，淀粉水解试验、柠檬酸利用试验、丙酸盐利用试验和V-P试验均为阳性。全基因组测序分析发现，菌株RDY21与地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）ATCC 14580模式菌株之间平均核苷酸相似性（average nucleotide identity， ANI）为99.02%，鉴定为地衣芽孢杆菌。菌株RDY21降解ZEN的最适温度、时间和培养基初始pH分别为37 ℃、72 h和7.0，在ZEN浓度为1~40 μg/mL环境下均具有一定毒素耐受性。与对照组相比，灌胃28 d 菌株RDY21对小鼠平均日增重、平均日采食量、脏器系数和血液生理、生化指标均无显著性影响（P>0.05）。 结论 本研究分离出1株具有高效降解ZEN能力的地衣芽孢杆菌RDY21，对小鼠无毒副作用，可作为微生物降解ZEN的候选菌株。

目的 试验旨在建立准确测定棉粕和饲料中苹婆酸含量的检测方法，以合理利用棉粕蛋白资源。 方法 通过优化2-吡啶甲酰肼与苹婆酸的反应条件、苹婆酸提取流程和质谱检测参数，建立采用外标法的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）定量苹婆酸的方法，并考察该检测方法的线性范围、检测限、定量限、回收率、批内与批间精密度和准确度，使用该方法进行实际样品检测。 结果 优化后2-吡啶甲酰肼与苹婆酸的最佳反应溶液组成为500 mmol/L EDC、15 mmol/L HOAt和40 mmol/L 2-吡啶甲酰肼，最佳反应温度为20 ℃，最佳反应时间为60 min。游离态苹婆酸的最佳提取液为甲醇，结合态苹婆酸最佳水解条件为50 ℃水解12 h。苹婆酸在1~1 000 ng/mL范围内线性关系良好，相关系数（r）均>0.99，检测限为5 μg/kg，定量限为12.5 μg/kg。游离态苹婆酸的回收率为80.13%~95.30%，批内变异系数为1.01%~2.21%，批间变异系数为1.61%~2.38%；结合态苹婆酸的回收率为85.46%~105.20%，批内变异系数为0.79%~2.01%，批间变异系数为3.40%~6.22%。经实际样品验证，建立方法可以精确测定棉油、棉粕、脱酚棉粕和棉籽蛋白原料中的苹婆酸，检测范围在0.09~1 812.76 mg/kg之间。 结论 本研究建立的LC-MS/MS检测方法具有高灵敏度、高准确度和高精密度等优点，适用于饲料中游离态和结合态苹婆酸的检测，可为合理利用棉粕提供技术支撑。

目的 本研究旨在揭示汗血马运动前后血浆与粪便代谢组的动态变化及其之间的关联性，挖掘潜在代谢标志物及关键代谢通路，为马匹运动适应性评估提供科学依据。 方法 选取10匹健康汗血马进行1 h运动训练，采集运动前及运动后（30 min内）血浆与粪便样本，采用非靶向液相色谱-质谱（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）代谢组学技术对样本进行检测，建立偏最小二乘判别分析（partial least squares discriminant analysis， PLS-DA）模型筛选差异代谢物，对其进行KEGG通路富集分析，并通过Spearman分析血浆-粪便代谢关联性。 结果 运动后血浆中106种代谢物显著变化（上调47种，下调59种），脂质代谢物占比最高，上调代谢物包括脂肪酸羟基脂肪酸酯（fatty acid esters of hydroxy fatty acids，FAHFAs）（如FAHFA（18∶1/18∶2））、棕榈酸和癸酰肉碱，下调代谢物以12-氧代植物二烯酸为代表。KEGG通路富集分析显示，差异代谢物显著富集于脂肪酸生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢通路。运动后粪便中鉴定出52种差异代谢物（上调8种，下调44种），其中肾上腺酸、FAHFA（17∶0/18∶0）及犬尿喹啉酸显著上调，而糖类、短链脂肪酸前体及氨基酸代谢物减少，反式岩芹酸及2-酮己酸也显著下调。差异代谢物主要富集于缬氨酸/亮氨酸/异亮氨酸生物合成通路。跨组织关联分析发现血浆与粪便中肾上腺酸显著正相关（r＝0.92，P<0.05），此外，6种FAHFAs，如FAHFA（18∶1/18∶2）在血浆显著积累，粪便FAHFA（17∶0/18∶0）水平同步升高。血浆中氧化脂质与黄素单核苷酸（riboflavin-5-phosphate，FMN）水平同步增加，粪便抗炎代谢物犬尿喹啉酸水平上调。 结论 运动后汗血马能量代谢以脂肪酸主导、氨基酸补充为特征。血浆中氧化脂质积累引发氧化应激，同时肾上腺酸在血浆与粪便中同步升高，FAHFAs及犬尿喹啉酸等抗炎代谢物呈现跨组织调节，提示机体可能通过多组织协同防御机制应对应激。粪便中反式岩芹酸、2-酮己酸等能量代谢物降低，说明肠道吸收功能增强协同供能。本研究首次发现FAHFAs类代谢物的跨组织响应特征，可为代谢标志物开发及抗疲劳策略提供新靶点。

目的 探究环指蛋白20（ring finger protein 20，RNF20）对小鼠性腺脂肪组织（gonadal white adipose tissues，gWAT）及3T3-L1脂肪细胞中支链氨基酸（branched-chain amino acids，BCAAs）代谢的影响及调控机制。 方法 以雄性脂肪特异性Rnf20基因敲除小鼠（Rnf20^flox/flox；adiponectin-Cre⁺，ASKO）及同窝野生型小鼠（Rnf20^flox/flox；adiponectin-Cre^-，WT）为研究对象，通过靶向代谢组学检测小鼠gWAT和血清中BCAAs含量，结合实时荧光定量PCR分析gWAT、肝脏及腓肠肌中BCAAs分解代谢基因（Bcat2、Bckdha等）的表达情况。利用siRNA干扰3T3-L1前体脂肪细胞内源性Rnf20基因表达，并诱导细胞成脂分化，通过油红O染色评估siRNF20（干扰组）和siNC（对照组）细胞的成脂分化效率，检测成脂分化标志基因、脂肪水解基因及BCAAs分解代谢基因的表达情况以及脂肪细胞培养基中BCAAs的含量。 结果 与WT小鼠相比，ASKO小鼠gWAT中BCAAs（亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸）含量均极显著升高（P<0.01），且BCAAs分解代谢相关基因Bcat2、Acad5、Ehhand、Hibch表达量显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01）；而血清中BCAAs含量及肝脏、腓肠肌中BCAAs分解代谢相关基因表达量均无显著变化（P>0.05）。与siNC组相比，体外敲除Rnf20基因可抑制3T3-L1细胞成脂分化，其中成脂标志基因Pparγ表达量显著降低（P<0.05），脂肪水解基因Adrb3表达量极显著升高（P<0.01）；成熟脂肪细胞中BCAAs分解代谢关键基因Bcat2、Bckdha表达量随Rnf20基因敲除而降低，且siRNF20组培养基中BCAAs含量极显著升高（P<0.01）。 结论 脂肪细胞Rnf20基因通过转录调控BCAAs分解代谢关键基因（Bcat2、Bckdha），维持细胞内BCAAs稳态；敲除Rnf20基因可抑制BCAAs分解代谢，导致BCAAs在脂肪组织内累积。研究结果为深入探究Rnf20基因功能提供了新的方向，为大动物脂肪沉积性状研究提供了新的基因素材。

目的 本试验旨在研究翻飞鸽在运动前后血气指标的变化以及血浆差异代谢物，分析其血液中酸碱平衡及其机体代谢差异，为探究翻飞鸽的运动及其疲劳恢复机制提供数据支持。 方法 试验选取180日龄健康状况良好的翻飞鸽12只，公母各半。采集翻飞鸽运动前静息及运动力竭后状态的血液样品，用于血气指标及非靶向代谢组学分析，筛选翻飞鸽运动前后差异代谢物并进行代谢通路分析。 结果 血气指标检测结果显示，与运动前相比，翻飞鸽在运动后血液中二氧化碳分压（PvCO₂）和总二氧化碳（TCO₂）水平显著降低（P<0.05），红细胞压积（Hct）和血红蛋白（Hb）浓度极显著降低（P<0.01），碳酸氢根（HCO₃^―）、钠离子（Na^＋）等指标均无差异显著（P>0.05）。血浆代谢组学检测发现，与运动前相比，翻飞鸽运动后正负离子模式下分别筛选出差异代谢物，其中别嘌呤醇核糖苷、鞘磷脂、反式-乌头酸、溶血磷酸酯、马钱苷元、琥珀酰腺苷等代谢物显著高于运动前（P<0.05）；甘胺酰-亮氨酸、氨基己酸、紫花前胡醇、十七烷酸、棕榈油酸等代谢物显著低于运动前（P<0.05）。差异代谢物显著富集到苯丙氨酸代谢、不饱和脂肪酸生物合成、亚油酸代谢、脂肪酸生物合成等途径。 结论 在本试验条件下，与运动前相比，翻飞鸽运动后血浆中PvCO₂、TCO₂浓度显著降低；Hct、Hb浓度极显著降低，并且主要影响翻飞鸽糖代谢、脂代谢及氨基酸代谢，试验结果为翻飞鸽运动后恢复及选育提供理论依据。

目的 探究稀释液中添加不同浓度芦丁对种公牛精液冷冻保存效果的影响。 方法 采用假阴道法采集3头西门塔尔牛和3头和牛的精液，将活力>75%的精液混合，分为5组：不添加芦丁稀释液的对照组和0.4、0.8、1.2及1.6 g/L芦丁处理组。采用计算机辅助精子分析系统（CASA）检测冻融后精子活力及运动参数（包括平均路径速度、曲线速度、直线速度、摆动性、线性度和前向性）；利用伊红染色法、低渗肿胀试验（HOST）、花生凝集素法和荧光法分别检测精子畸形率、质膜完整性、顶体完整性、精子活性氧（ROS）水平；并使用试剂盒测定精子的抗氧化性能。 结果 0.8 g/L芦丁处理组精液冻融后的精子活力、曲线速度、直线速度、摆动性、线性度以及质膜完整性和顶体完整性均显著高于对照组和其他处理组（P<0.05），平均路径速度和前向性显著高于对照组（P<0.05）；0.8 g/L芦丁处理组精液冻融后的精子畸形率、ROS水平和丙二醛（MDA）含量均显著低于对照组（P<0.05）；0.8和1.2 g/L芦丁处理组精液冻融后精子的过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性均显著高于对照组（P<0.05）；0.8 g/L芦丁处理组精液冻融后总抗氧化能力（T-AOC）显著高于对照组和其他处理组（P<0.05），另1.2和1.6 g/L处理组精液的T-AOC均显著高于对照组（P<0.05）。 结论 稀释液中添加0.8 g/L芦丁对牛精液冷冻保存效果最好，冻融后精子活力和运动性能均显著提高，畸形率显著降低，质膜完整性和顶体完整性显著提高，ROS水平和MDA含量显著降低，T-AOC、GSH-Px和CAT活性显著提高。

目的 利用CRISPR/Cas9技术构建成纤维细胞生长因子受体1（fibroblast growth factor receptor 1， FGFR1）基因敲除牛乳腺上皮细胞系（bovine mammary epithelial cells，bMECs），探究FGFR1基因缺失对细胞存活、增殖及泌乳功能的影响，以期揭示其在乳腺发育和泌乳中的分子调控机制。 方法 针对FGFR1基因的第3、4外显子分别设计sgRNA并在体外鉴定切割效率后，构建FGFR1基因敲除质粒；电转染bMECs，利用嘌呤霉素和稻温毒素筛选7 d，收集细胞提取基因组DNA，经PCR扩增与Sanger测序鉴定FGFR1基因编辑情况；利用有限稀释法从目标编辑细胞群中挑取单克隆细胞，借助TA克隆技术进一步筛选出具有单一基因型的FGFR1基因敲除细胞株；通过Western blotting检测单克隆细胞株的敲除效率，利用CCK-8法测定细胞活力，采用实时荧光定量PCR检测单克隆细胞株中增殖和泌乳相关基因的表达情况。 结果 体外切割试验显示，2条sgRNA的切割效率分别为82.87%和27.80%，表明成功构建敲除质粒。电转染72 h后发现超过95%的bMECs带有红色荧光，且药物筛选后编辑区域出现多个双峰，证明编辑效果明显。挑取384株单克隆细胞，扩繁92株细胞，其中72株细胞FGFR1基因被编辑（78.26%），31株sgRNA1位点发生编辑（33.70%），55株sgRNA2位点（59.78%）发生编辑，最终获得8株形态饱满、长势良好的FGFR1基因敲除单克隆细胞株。测序结果显示，单克隆细胞株编辑位点呈片段缺失和碱基替换等多种编辑形式，其中KO#2细胞株的2个位点均发生编辑，且仅有1种编辑类型；Western blotting和CCK-8结果显示，与对照组相比，KO#2株细胞敲除效果极显著（P<0.01），但敲除FGFR1基因对细胞活力无显著影响（P>0.05）。实时荧光定量PCR结果显示，与对照组相比，敲除FGFR1基因后细胞增殖相关基因的表达量无显著差异（P>0.05），但泌乳合成相关基因的表达量显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01）。 结论 本研究成功构建1株FGFR1基因敲除的bMECs，且敲除FGFR1基因对细胞存活及增殖无显著影响，但可显著抑制其泌乳合成功能，这为进一步研究FGFR1基因在bMECs中的功能和作用机制提供了依据。

目的 奶牛体外胚胎生产-移植（in vitro embryo production and embryo transfer，IVP-ET）是现代奶牛养殖的重要繁殖手段之一。为解析奶牛体外胚胎移植受胎率的影响因素，本研究利用大规模数据分析了荷斯坦牛体外胚胎移植受胎率的表型特征，为优化体外胚胎生产移植技术体系提供可用信息。 方法 本研究收集了11个规模化奶牛场4 534头荷斯坦牛的5 155条体外胚胎移植记录及其对应的孕检记录，采用Logistic回归模型分析各非遗传因素（如胚胎因素等）对奶牛体外胚胎移植受胎率的影响。 结果 荷斯坦青年牛体外胚胎移植总体受胎率为51.29%。胚胎因素（保存状态、发育阶段、体外培养天数）及受体牛移植次数对移植受胎率有极显著影响，其中，移植新鲜胚胎的受胎率极显著高于冷冻胚胎（P<0.01）；不同发育阶段的胚胎中，发育至扩张囊胚的受胎率极显著高于囊胚（P<0.01）；体外培养天数不同的胚胎中，培养至第6天下午、第7天上午及下午的胚胎的移植受胎率均极显著高于培养至第8天下午的胚胎（P<0.01）；首次移植的受胎率极显著高于非首次移植（P<0.01）。受体牛月龄和胚胎父本对移植受胎率有显著影响，其中>14.5且≤15月龄受体牛的受胎率最高（52.59%），且极显著高于<14月龄的受体牛（P<0.01）；胚胎父本显著影响移植受胎率（P<0.05），表明由父本决定的胚胎内在质量是影响移植成功与否的关键生产端因素，进一步提示胚胎生产与胚胎移植息息相关。 结论 基于大规模胚胎移植记录，本研究发现胚胎保存状态、发育阶段、体外培养天数及受体牛移植次数对移植受胎率有显著影响，优化胚胎质量与选择适宜受体是提高荷斯坦牛体外胚胎移植受胎率的关键。

目的 本研究旨在扩增丽江猪清道夫受体B族成员2（scavenger receptor class B member 2，SCARB2）基因序列并进行生物信息学分析，检测其在丽江猪各组织中的表达情况，为后续探究该基因的功能提供理论依据。 方法 采集6月龄丽江猪脂肪组织，参考GenBank中野猪（Sus scrofa）的SCARB2基因mRNA序列（登录号：NM_001244155.1）设计引物扩增SCARB2基因CDS区序列并测序，利用生物信息学软件分析SCARB2基因的序列特征和密码子偏好性，分析多个物种与丽江猪、中外猪种与丽江猪SCARB2基因序列的相似性并构建系统进化树，预测SCARB2蛋白理化性质和蛋白结构。使用实时荧光定量PCR检测SCARB2基因在2、4、6月龄丽江猪和6月龄杜洛克猪背部脂肪、心脏、肝脏、肺脏、肾脏等组织中的表达情况。 结果 丽江猪SCARB2基因CDS区序列总长为1 437 bp，编码478个氨基酸。丽江猪与山羊、绵羊、牛、马、大鼠、小鼠、人和原鸡的相似性分别为91.3%、91.2%、91.0%、89.8%、82.6%、82.5%、76.0%和66.0%；在6个地方猪种中，除巴马小型猪外，丽江猪与中国地方猪的相似性均为99.4%，与外种猪的相似性为99.1%~99.3%。系统进化树分析显示，丽江猪与野猪、牛、山羊、绵羊聚为一支，原鸡形成单独分支。丽江猪SCARB2蛋白属于亲水蛋白，有2个跨膜螺旋和1个信号肽切割位点，包含10个N-糖基化位点和39个磷酸化位点；其二级结构与三级结构均以无规则卷曲为主。SCARB2基因在6月龄丽江猪背部脂肪和肝脏组织中的表达量极显著高于其他组织（P<0.01）；随着月龄增长，SCARB2基因在丽江猪腹部脂肪、背部脂肪和肩部脂肪组织中的表达量逐渐升高，且在2、6月龄间达显著或极显著水平（P<0.05；P<0.01）；6月龄丽江猪背部脂肪组织中SCARB2基因表达量极显著高于杜洛克猪（P<0.01）。 结论 本研究成功扩增了丽江猪SCARB2基因序列并分析了其分子特征，其在皮下脂肪、肝脏和肺脏等多个组织中均有表达，且随月龄增长在皮下脂肪组织中的表达量呈显著增加。因此，SCARB2可作为研究丽江猪脂肪沉积性状的候选基因，研究结果可为进一步探究猪脂肪沉积的分子机制提供参考。

目的 构建无量山乌骨鸡血红素加氧酶1（heme oxygenase 1，HMOX1）基因过表达载体，并转染鸡原代前脂肪细胞，探究过表达HMOX1基因对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响。 方法 取1日龄无量山乌骨鸡雏鸡皮下脂肪组织，提取总RNA并反转录成cDNA，扩增HMOX1基因CDS区，使用质粒pcDNA3.1-mRFP构建过表达载体pcDNA3.1-HMOX1-mRFP，并进行酶切和测序鉴定；通过转染试剂将pcDNA3.1-HMOX1过表达载体转染鸡原代前脂肪细胞中并检测过表达效率；利用CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞周期；利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测增殖相关基因P21、CDK1、PCNA mRNA和蛋白表达量。 结果 酶切和测序结果表明，pcDNA3.1-HMOX1-mRFP过表达载体构建成功。实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示，与对照组相比，转染pcDNA3.1-HMOX1-mRFP后细胞中HMOX1基因mRNA和蛋白表达量均极显著上调（P<0.01），表明鸡原代前脂肪细胞中成功过表达HMOX1。CCK-8检测结果显示，与对照组相比，转染12 h时过表达HMOX1组细胞活力显著上升（P<0.05），转染36和48 h时细胞活力极显著下降（P<0.01）。流式细胞术检测结果显示，与对照组相比，12 h时过表达HMOX1组S期的细胞数量极显著增加（P<0.01），G1期的细胞数量极显著降低（P<0.01）；48 h时S期的细胞数量显著降低（P<0.05）。增殖相关基因检测结果显示，两组间细胞中P21、CDK1基因mRNA和蛋白表达量无显著差异（P>0.05）；过表达HMOX1组细胞中PCNA基因mRNA和蛋白表达量均显著低于对照组（P<0.05）。 结论 本研究成功构建HMOX1基因过表达载体，转染无量山乌骨鸡原代前脂肪细胞后抑制了细胞增殖。试验结果可为进一步研究HMOX1对无量山乌骨鸡原代前脂肪细胞的分化作用提供理论指导。

目的 采用原核表达系统表达鹅星状病毒（Goose astrovirus，GAstV）ORF2蛋白，并制备其兔抗多克隆抗体，为该病毒致病机制和诊断方法研究提供物质基础。 方法 构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2，并通过PCR和双酶切对重组质粒鉴定后，将其转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，通过IPTG诱导蛋白表达并优化反应条件，获得GAstV ORF2蛋白。利用纯化的GAstV ORF2蛋白免疫新西兰大白兔，制备兔抗GAstV ORF2多克隆抗体。采用间接ELISA法测定多克隆抗体效价，通过Western blotting和间接免疫荧光（IFA）法检测多克隆抗体的免疫原性和特异性；为了明确GAstV在雏鹅组织中的嗜性和定位，利用制备的多克隆抗体，通过免疫组织化学（IHC）法检测感染雏鹅肝脏和肾脏组织中的病毒分布情况。 结果 PCR和双酶切鉴定表明成功构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2，通过原核表达成功获得GAstV ORF2蛋白，纯化后蛋白浓度为1.38 mg/mL。免疫新西兰大白兔后获得兔抗GAstV ORF2蛋白多克隆抗体，其效价达1∶100 000。Western blotting结果显示，多克隆抗体与纯化后GAstV ORF2蛋白出现特异性反应条带；IFA结果显示，多克隆抗体与GAstV及真核表达GAstV ORF2蛋白产生特异性反应；IHC检测结果显示，GAstV在感染雏鹅的肝脏与肾脏广泛分布，GAstV特异性表达于实质细胞与炎性细胞的胞浆内。 结论 本研究成功构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-ORF2，并进行体外诱导表达制备了兔抗GAstV ORF2蛋白多克隆抗体，该多克隆抗体效价高、特异性强，可用于GAstV感染雏鹅体内病毒抗原检测。

目的 通过对黑龙江省猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）毒株进行分离鉴定，基于PEDV分离株S、ORF3基因序列进行遗传进化分析，丰富现有PEDV材料，为猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）的防治及疫苗研发提供参考依据。 方法 采集养猪场疑似猪流行性腹泻病料，利用Vero-E6细胞进行适应性培养获得病毒，并通过RT-PCR和间接免疫荧光试验（IFA）对毒株进行分离鉴定。通过PCR分别扩增PEDV分离毒株的S1、S2和ORF3基因，构建重组质粒并测序鉴定，获得PEDV分离株的S、ORF3基因序列。将分离株与26株参考毒株的S和ORF3基因序列进行核苷酸序列相似性比对和遗传进化分析，确定分离毒株的所属亚群。 结果 在Vero-E6细胞上培养分离的PEDV毒株，感染细胞出现变形圆缩、折光性降低，细胞发生融合，后期细胞脱落出现空斑等典型细胞病变；RT-PCR和IFA检测显示，扩增均出现片段大小约600 bp的特异性条带，分离株感染细胞后均可与PEDV N蛋白单克隆抗体发生特异性反应，表明分离的3株病毒株均为PEDV，分别命名为HLJ、HLJ2020和HLJ2021株。成功构建PEDV各分离株的S1、S2和ORF3基因重组质粒并测序获得相应基因序列。核苷酸序列相似性比对与遗传进化树分析结果显示，PEDV HLJ与HLJ2020株为GⅠb亚群毒株，PEDV HLJ2021株归入GⅡc亚群。 结论 本研究从黑龙江地区腹泻猪小肠组织中成功分离获得3株PEDV流行毒株，其中分离毒株PEDV HLJ与PEDV HLJ2020属于GⅠb亚群， PEDV HLJ2021株属于GⅡc亚群。

目的 2021年8月以来，安徽、山东等地种鸭群出现不明原因产蛋下降，伴随精神沉郁、卵巢出血等症状。本研究旨在明确病原特征，为种鸭产蛋下降的防控提供依据。 方法 对2022年9月山东沂水采集的病鸭卵巢组织样品，使用鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblast，DEF）进行病毒分离获得毒株后，利用第二代测序技术对病毒基因组测序，将所得序列与参考病毒基因库进行比对，以确定病原种类，并进一步分析病毒基因组结构，明确编码蛋白情况。依据测序得到的病毒序列设计特异性引物进行病原鉴定。将病毒基因与参考序列进行相似性比对和遗传进化分析，探究病毒遗传特征与进化关系。使用产蛋高峰种鸭开展回归试验，验证病毒致病性。 结果 病料样品接种鸭胚成纤维细胞后，细胞出现病变特征。全病毒基因库对比分析结果显示，样本中存在与环状病毒科密切相关的病毒序列，经序列拼接后命名其为鸭环状病毒（Duck orbivirus， DORV），其基因组由10个双链RNA片段构成，编码12种蛋白。PCR结果显示可特异性扩增出鸭环状病毒片段，并将分离毒株命名为DORV-SDYS。DORV-SDYS与帕里泻湖病毒（PLV）、科里帕塔病毒（CORV）和阿卡多病毒（ACAV）亲缘关系较近，它们之间VP5片段核苷酸序列相似性为80.1%~82.4%，氨基酸序列相似性为88.1%~91.1%。遗传特征分析显示，DORV-SDYS株在进化上具有独特性。动物回归试验表明，DORV-SDYS感染可导致种鸭产蛋率下降，并引起卵泡病理损伤。 结论 本研究从山东沂水地区产蛋下降病鸭卵巢组织中成功分离得到1株病毒，并将其命名为鸭环状病毒，明确了其全基因组编码区特征，证实鸭环状病毒感染是导致种鸭产蛋下降的病因，填补了环状病毒在水禽宿主致病性研究的空白，对水禽产业健康发展具有重要意义。

目的 牛呼吸道疾病综合征（BRDC）作为一种多病原疾病，可导致牛群出现高发病率和高死亡率，对养牛业造成了严重影响。为评估新疆地区患有BRDC牛的病毒性病原感染情况，本研究对新疆6个地区的BRDC进行了病毒性病原检测。 方法 2023年1-12月在新疆焉耆、喀什、昌吉、博乐、伊犁、阿克苏6个地区采集561份患有呼吸道症状牛的鼻拭子，采用PCR技术对引起BRDC常见的7种病毒牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛腺病毒3型（BAV-3）、牛冠状病毒（BCoV）、A型牛鼻炎病毒（BRAV）、B型牛鼻炎病毒（BRBV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛副流感病毒3型（BPIV-3）进行检测，分析不同季节、不同地区和不同品种牛群的7种病原感染情况。 结果 7种病原均有检出，IBRV检出率最高（14.4%），BVDV次之（13.0%），BAV-3检出率最低（7.0%）；混合感染以二重感染为主（13.4%），主要病原包括BAV-3+BCoV（1.8%）、IBRV+BPIV-3（1.6%）和BRBV+BVDV（1.6%）；三重感染（3.7%）检出率最高的是IBRV+BPIV-3+BVDV（0.5%）；四重感染（0.6%）和五重感染（0.6%）也均有检出，如IBRV+BRAV+BRBV+BPIV-3（0.4%）和IBRV+BAV-3+BCoV+BRAV+BPIV-3（0.2%）等。季节性分析显示，不同病原的检出率具有显著差异，春季BAV-3检出率最高（11.0%），夏季BVDV检出率最高（34.0%），秋季IBRV检出率最高（61.3%），冬季则以BPIV-3检出率最高（38.7%）。在地理分布上，焉耆地区的BRBV检出率最高（50.0%），喀什地区以BAV-3检出率最高（15.3%），昌吉和博乐地区以IBRV检出率最高（分别为28.8%和22.6%），伊犁地区以BVDV检出率最高（55.7%），而阿克苏地区则检出了相同比例的BRBV与BPIV-3（各35.3%）。此外，将样本按照牛的用途分类为肉牛和奶牛2组，结果显示，奶牛主要感染IBRV（29.5%），而肉牛则以BVDV感染为主（12.9%）。 结论 调查结果表明，2023年新疆部分地区BRDC的病毒性病原感染存在明显的季节、地区和品种之间的差异性，本研究可为制定新疆地区BRDC的防控策略提供参考。

目的 探究坏死梭杆菌（Fusobacterium necrophorum subsp. necrophorum，Fnn）感染对奶牛真皮成纤维细胞（bovine dermal fibroblasts，BDFs）线粒体动力学与自噬的影响及其潜在机制。 方法 从奶牛趾间皮肤中分离培养BDFs，与1×10⁸ CFU/mL的Fnn共培养12 h建立感染模型组（Fnn），以未感染的细胞作为对照组（CON），观察Fnn感染后BDFs形态变化，通过CCK-8试剂盒检测BDFs细胞活性，实时荧光定量PCR检测线粒体动力学、生物合成以及线粒体自噬相关基因表达的变化，免疫荧光法检测相关蛋白表达的变化。 结果 与CON组相比，Fnn组细胞出现肿胀、体积增大的变形现象，Fnn感染可极显著抑制BDFs活性（P<0.01）。实时荧光定量PCR结果显示，与CON组相比，Fnn感染后BDFs的过氧化物酶体增殖受体γ辅激活因子α（PGC-1α）、核呼吸因子-1（Nrf1）、线粒体转录因子A（Tfam）、线粒体融合素基因-2（Mfn-2）、磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1（PINK1）、E3泛素连接酶（Parkin）基因相对表达量显著或极显著下降（P<0.05；P<0.01），视神经萎缩蛋白1（Opa1）、Mfn-1、Sequestosome 1（P62）基因相对表达量有下降的趋势（P>0.05），线粒体裂变蛋白1（Fis1）、微管相关蛋白1轻链3α（LC3α）和LC3β基因相对表达量极显著升高（P<0.01）。免疫荧光法检测结果显示，与CON组相比，Fnn感染后，BDFs线粒体动力蛋白相关蛋白1（Drp1）、PINK1、Parkin、P62荧光信号增强，Opa1、Mfn-1、LC3荧光信号减弱。 结论 Fnn感染可破坏BDFs线粒体生物合成，扰乱线粒体融合与分裂进程，诱导线粒体自噬的发生。本研究结果可为深入理解腐蹄病的发病机制提供新的理论依据。

目的 研究蛋鸡肠黏膜在经历损伤后对再次损伤的抵抗力是否增强，并探究其可能机制，为探索促进蛋鸡肠黏膜损伤修复的手段提供新视角。 方法 选取78羽7日龄海兰白雏鸡，分为13个处理组（每组6羽），随机选取6羽雏鸡腹腔注射PBS作为阴性对照组，记为1^st NC组；另外72羽雏鸡采用腹腔注射脂多糖（LPS，10 mg/kg BW）诱导肠黏膜损伤，在注射后1、2、4、6、8、24 h分别随机选取6羽雏鸡处死并采样，记为1^st Xhpi（hours post injection）组（X代表注射后的采样时间）。在注射后48 h时，从注射LPS的雏鸡中随机选取6羽雏鸡腹腔注射PBS，作为第二阴性对照组，记为作2^nd NC组（视同1^st 48hpi组），剩余雏鸡第2次注射同剂量LPS。在第2次注射LPS后1、2、4、6、8 h分别随机选取6羽雏鸡处死并采样，分别记为2^nd Xhpi组。所有组雏鸡采集血液、十二指肠组织并分离肠隐窝，分析其屏障功能、肠道干细胞（intestinal stem cells，ISCs）活性及隐窝微环境的变化。 结果 在LPS诱导损伤后，1^st 4hpi组肠黏膜出现炎性细胞浸润、绒毛高度/隐窝深度比值下降、渗透性增加及黏液层厚度降低等损伤现象。注射后48 h，2^nd NC组损伤程度减轻，屏障功能增强，表现为紧密连接Ocln基因表达量、杯状细胞密度、黏液层厚度及黏蛋白Muc2基因表达量均高于1^st NC组。此时，进行第2次LPS诱导损伤，与2^nd NC组相比，2^nd 4hpi组肠黏膜的炎性细胞浸润程度与渗透性均未显著升高，但Claudin-1基因与补体蛋白C5基因表达量显著上调（P<0.05）。ISCs分析结果显示，1^st 4hpi组活跃态ISCs（active intestinal stem cells，aISCs）活性下降，之后逐渐恢复，在损伤后48 h恢复正常；2^nd 4hpi组休眠态ISCs（reserve intestinal stem cells，rISCs）可快速激活并维持较高活性。肠隐窝分析结果显示，在2次损伤过程中，肠隐窝Notch信号通路均受抑制。 结论 在经历损伤修复后，肠黏膜屏障功能增强，肠隐窝局部Notch信号通路受到抑制，第2次损伤可快速激活rISCs，并促进ISCs向分泌型上皮细胞分化。

目的 探讨icaB基因对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）生物被膜形成能力及耐药性的影响。 方法 本研究以MRSA N315标准株为研究对象，利用同源重组技术构建icaB基因敲除株N315ΔicaB，比对分析N315ΔicaB株与野生株（N315 WT）在生长趋势、菌落形态和颜色、细胞壁厚度、生物被膜形成能力及耐药性方面的差异。 结果 生长曲线和菌落形态观察发现，N315ΔicaB株生长趋势、菌落形态和颜色与N315 WT株相比无差异。细胞壁厚度测定结果显示，与N315 WT株相比，N315ΔicaB株细胞壁厚度无显著变化（P>0.05）。生物被膜形成能力检测结果显示，N315ΔicaB株生物被膜形成能力与N315 WT相比无显著差异（P>0.05）。药物敏感性检测结果显示，青霉素、苯唑西林、庆大霉素、环丙沙星和呋喃妥因对N315ΔicaB株的最小抑菌浓度均低于N315 WT株。 结论 敲除icaB基因不影响MRSA的生长状态及生物被膜形成能力，但能提高其对部分抗菌药的敏感性。本研究成功构建了icaB基因敲除株N315ΔicaB，为挖掘icaB基因新功能提供了理想的细胞模型，为从基因水平深入研究生物被膜调控网奠定了基础，也为以icaB基因为靶点提升抗菌药物对MRSA的疗效提供了科学依据。

目的 为确诊安阳动物园一起蓝孔雀急性死亡病例，本研究开展了临床诊断与实验室检测。 方法 观察病死孔雀临床症状和病理变化，通过鉴别培养基、革兰染色、生化鉴定、16S rRNA基因PCR扩增及构建系统发育树、动物试验等方法分离鉴定病原菌，利用结晶紫染色法对分离菌进行生物被膜形成能力检测，采用K-B纸片法进行药敏试验，通过PCR检测耐药基因。 结果 死亡孔雀体表无明显症状，对孔雀进行剖检观察发现，其心包积液增多、浑浊，肝脏肿大，肾脏有尿酸盐沉积，肠道出血。无菌采集死亡孔雀肝脏组织，划线接种于麦康凯培养基，分离出粉红色菌落，镜检观察到病原菌呈红色短杆状，单个或成对散在分布，疑似肠杆菌科细菌。生化鉴定结果显示，分离菌吲哚、MR、戊糖、山梨醇等为阳性，西蒙氏枸橼酸盐、V-P、尿素、硫化氢等为阴性；16S rRNA基因PCR扩增片段经测序得到大小约为1 500 bp的序列（GenBase登录号：C_AA110994.1）。系统发育树显示，分离菌株与大肠杆菌相似性最高，为100%，确定该分离菌为大肠杆菌；分离菌比标准菌株被膜形成能力强，且能导致BALB/c小鼠肝脏和脾脏肿大、肺脏淤血、肠壁变薄、肠道出血、肠绒毛脱落等。分离菌对左氧氟沙星、诺氟沙星等药物敏感，对四环素、链霉素等耐药。耐药基因PCR扩增结果显示，分离菌检测到tetA、ampC、bla_TEM、Sul1、Sul2和strA-strB 6个耐药基因。 结论 本研究分离到1株蓝孔雀源致病性大肠杆菌。药敏试验结果显示，该大肠杆菌菌株对左氧氟沙星、诺氟沙星等药物敏感，对四环素、链霉素等耐药，并携带6种耐药基因。本研究结果可为蓝孔雀大肠杆菌病的诊断和临床用药提供借鉴。

目的 探究四川肉牛真菌性皮肤病的病原，为该病的防治提供参考。 方法 采集四川各地疑似皮肤癣病的患畜皮屑，用三点接种法将采集的样本接种于皮肤癣菌鉴别培养基，将分离得到的菌株经内部转录间隔区（ITS）序列扩增后通过NCBI数据库BLAST分析基因相似性并构建系统发育树，以10⁷ CFU/mL分离菌孢子悬液感染免疫抑制小鼠，观察临床症状和病理学特征，微量二倍稀释法探究分离菌耐药表型。 结果 从24个样本中分离到10株真菌（rntv01~rntv10）。PCR扩增结果显示，分离株均得到大小为681 bp的扩增片段；BLAST比对结果显示，分离株与疣状毛癣菌相似性为97%~100%；动物试验结果显示，免疫抑制小鼠感染该菌后皮肤出现被毛脱落、结痂、皮屑增多等症状，HE染色后观察到表皮角质层角化不全、炎性细胞增生，PAS染色后观察到大量菌丝侵染；药敏试验结果显示，除rntv10外，其余菌株对两性霉素B中介；分离菌对伊曲康唑敏感性不同，rntv09、rntv10敏感，rntv01、rntv04~rntv08中介，rntv02、rntv03耐药；rntv10对酮康唑敏感、对5-氟胞嘧啶中介，其余菌株均为耐药株；所有菌株对环吡酮胺中介，对氟康唑和特比萘芬耐药。 结论 四川肉牛真菌性皮肤病主要病原是疣状毛癣菌，该菌可引起小鼠皮肤的侵袭性感染，患病牛可用两性霉素B、伊曲康唑或环吡酮胺进行治疗。

目的 Cathelicidin是一类脊椎动物特有的内源性抗菌肽类物质，具有明显的抗菌抗炎作用。本研究在棘胸蛙中鉴定一种新的Cathelicidin，并探究Cathelicidin基因的结构及功能，为抗菌肽基因家族的研究提供依据。 方法 采用基因克隆方法获得Cathelicidin基因序列全长，利用生物信息学方法分析其编码蛋白的理化性质、结构域、信号肽、二级结构和三级结构，通过Mega X软件构建系统进化树。利用实时荧光定量PCR方法检测棘胸蛙各组织中Cathelicidin基因表达水平，以及在弗氏柠檬酸杆菌和布氏柠檬酸杆菌胁迫下Cathelicidin基因表达变化。 结果 Cathelicidin基因序列全长为730 bp，开放阅读框为465 bp，编码154个氨基酸，预测Cathelicidin分子质量为137.3 ku，等电点（pI）为5.20；1-20位氨基酸为信号肽，21-116 位氨基酸间有1个结构域，该结构域内存在4个保守的半胱氨酸残基，末端有一段含18个氨基酸的成熟肽。二级结构预测显示，Cathelicidin蛋白α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲占比分别为35.7%、19.5% 和44.8%；三级结构同源建模显示，其由1条肽链盘绕形成，功能域由α-螺旋和β-折叠构成。系统进化分析表明，棘胸蛙Cathelicidin与蛙科的云南棘蛙亲缘关系最近，聚为一支。实时荧光定量PCR结果显示，Cathelicidin基因在棘胸蛙各组织中均表达，其中在肝脏和肾脏中表达量较高。柠檬酸杆菌感染后，棘胸蛙肝脏中Cathelicidin基因的表达呈现时序性表达变化特征，弗氏柠檬酸杆菌感染后，与0 h相比，其表达量在72 h出现极显著高峰；而布氏柠檬酸杆菌感染则引起其表达持续下调。 结论 Cathelicidin基因结构特征明确，在棘胸蛙各组织均广泛表达，其mRNA表达随不同病原菌侵染呈现时序性表达变化，为后续深入挖掘Cathelicidin基因在养殖产业中的应用提供理论基础。

目的 筛选犬乳腺肿瘤细胞CHMM和CHMP的差异表达蛋白，为寻找犬乳腺肿瘤诊断治疗有效标志物提供科学依据。 方法 以犬乳腺肿瘤胸腔转移细胞CHMM和原发细胞CHMP为研究对象，通过显微观察、克隆试验和Transwell试验比较2种细胞形态、克隆能力和迁移能力。通过高效液相色谱-质谱分析技术筛选出2种细胞中差异表达蛋白，并对差异表达蛋白进行GO功能和KEGG通路富集分析。采用STRING数据库对差异表达蛋白进行蛋白互作分析。通过Western blotting试验验证蛋白质组学结果。 结果 CHMP细胞呈现长梭形，单细胞生长，CHMM细胞成簇生长，细胞相对较小。CHMP细胞有更强的迁移能力，CHMM细胞有更强的的克隆能力。测序共筛选出2 049种差异表达蛋白（差异倍数>1.2且P<0.05），其中1 161种下调蛋白，888种上调蛋白。GO功能富集分析结果显示，2种细胞差异表达蛋白参与的生物过程主要包括细胞过程、单向组织过程、代谢过程、生物调节、刺激应答等；细胞组分包括细胞、细胞部分、细胞器，细胞器部分等；分子功能主要有催化活性、结合、转运活性等。KEGG通路富集分析显示，2种细胞差异表达蛋白主要参与代谢途径信号通路等。差异表达蛋白互作分析显示，CD44、MMP14、DPYSL3蛋白有相互作用关系。Western blotting显示，与CHMM细胞相比，CHMP细胞中GSDMD表达量显著上升（P<0.05），CD44表达量显著下降（P<0.05），与蛋白质组学结果一致。 结论 经蛋白质组学筛选出犬乳腺肿瘤细胞CHMM和CHMP中的GSDMD等1 161种下调蛋白和CD44等888种上调蛋白，涉及代谢途径等多个生物过程，本研究结果可为犬乳腺肿瘤的诊断和治疗提供科学依据。

目的 明确河北省某貉场貉死亡的病因，为有效防控该病提供科学依据。 方法 无菌采集病死貉病变组织及呼吸道分泌物，经病原分离培养获得目标菌株。通过革兰染色对分离菌株进行形态学鉴定；利用16S rRNA基因序列比对明确分离菌株分类；采用PCR扩增检测分离菌株的毒力基因及耐药基因，进一步开展药敏试验评估其耐药表型；通过小鼠致病性试验检测分离菌株的致病性。 结果 从貉体内分离获得的菌株在TSB琼脂平板上呈圆形、边缘整齐的灰白色菌落，在MAC琼脂平板上呈光滑、湿润的透明菌落；革兰染色可观察到菌株呈球杆状、两极着色的革兰阴性菌。16S rRNA序列比对分析显示，分离株与GenBank中其他支气管败血波氏杆菌的相似性为97.0%~100%，鉴定该分离株为支气管败血波氏杆菌。毒力基因和耐药基因检测显示，分离株检出prn、bvgs、fla、fhaB、cyaA、dnt 6种毒力基因和bla_TEM、bla_SHV、parC、tetC、gyrA 5种耐药基因。药敏试验结果显示，分离菌株对青霉素类、大环内酯类、糖肽类、磺胺类、硝基呋喃类抗菌药表现耐药，对氨基糖苷类和喹诺酮类表现敏感。致病性检测显示，分离菌株对小鼠的半数致死量为3.67×10⁷ CFU。 结论 本试验从死亡貉体内分离获得1株支气管败血波氏杆菌，其携带多种毒力基因和耐药基因，对青霉素类、大环内酯类、糖肽类、磺胺类、硝基呋喃类抗菌药表现耐药，对氨基糖苷类和喹诺酮类敏感，具有多重耐药性和较强致病性。本研究结果为貉支气管败血波氏杆菌病的诊断、临床用药及疫苗研发提供了科学依据。

目的 研究云南地区猪源胸膜肺炎放线杆菌的生物学特性。 方法 从云南红河州某猪场患呼吸道疾病猪肺脏中分离细菌，采用生化试验、16S rDNA序列分析和PCR扩增鉴定分离菌，并分析分离菌的血清型、致病性、药物敏感性和耐药基因等生物学特性。 结果 从病猪肺脏样品中分离到1株革兰阴性小球杆菌，将其编号为YN240724。生化鉴定结果显示，分离菌分解葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖和甘露醇产酸，氧化酶、尿素酶及硝酸盐还原试验呈阳性，其生化特性与胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）参考株相同。16S rDNA基因序列分析结果显示，分离菌与胸膜肺炎放线杆菌模式菌株ATCC 27088^T和其他胸膜肺炎放线杆菌参考株间的16S rDNA序列相似性分别为100%和99.6%~100%；分离菌株与全部胸膜肺炎放线杆菌参考株形成同一个进化分支；基于上述特征分离菌YN24074被鉴定为胸膜肺炎放线杆菌。血清型鉴定结果显示，该分离菌为胸膜肺炎放线杆菌血清7型。耐药基因检测结果显示，分离菌携带β-内酰胺内耐药基因bla_CIT和bla_TEM以及四环素类耐药基因tetM。药敏试验结果显示，分离菌对氨基糖苷类（庆大霉素和阿米卡星）、喹诺酮类（氧氟沙星）、酰胺醇类（氟苯尼考）、四环素类（四环素）、磺胺类（磺胺甲噁唑）以及头孢类（头孢噻肟和头孢呋辛）敏感，对青霉素类（青霉素、氨苄西林和哌拉西林）以及糖肽类（万古霉素）耐药。致病性试验结果显示，分离菌对小鼠的半数致死量（LD₅₀）为7.5×10⁴ CFU，致病性较强。 结论 本研究从云南地区分离获得1株猪源血清7型胸膜肺炎放线杆菌，其携带耐药基因bla_CIT、bla_TEM及tetM，对多种抗菌药物表现耐药，致病性较强。试验结果可为云南地区猪场猪传染性胸膜肺炎的治疗和免疫防控提供重要参考。

目的 鹿茸具有显著促进软骨损伤修复的作用，本研究旨在探究鹿茸中可促进软骨细胞增殖的关键因子。 方法 采用超声和冷水提取法分别对鹿茸顶端生长中心组织进行提取，并通过高效液相色谱法鉴定最优提取方法；采用制备液相色谱分离鹿茸提取物中不同峰组分；体外培养大鼠关节软骨细胞，通过CCK-8法比较鹿茸提取物各峰组分对细胞增殖的影响；采用非靶向代谢组学分析鹿茸提取物不同峰组分的组成差异；进一步通过CCK-8法验证鹿茸提取物关键物质对大鼠软骨细胞增殖的影响。 结果 高效液相色谱分析显示，超声提取法为鹿茸提取物的高效提取方法，所获峰型良好且操作便捷。制备液相色谱成功分离鹿茸提取物4个单独峰组分，各峰均与鹿茸提取物色谱峰一一对应，基线平稳、峰型良好，杂峰信号极少或无。进一步试验证明，与其他浓度的鹿茸提取物相比，0.1 mg/mL鹿茸提取物可极显著促进大鼠关节软骨细胞增殖（P<0.01）。与其他峰组分相比，峰1组分对大鼠关节软骨细胞增殖有极显著促进作用（P<0.01）。非靶向代谢组学分析表明，鹿茸提取物峰组分以脂质类为主（43.74%）；主成分分析（PCA）可清晰区分峰1~4组分；其中峰1组分的精胺相对含量极显著高于其他组分（P<0.01）。与其他浓度精胺相比，0.25 mg/mL精胺极显著促进大鼠关节软骨细胞增殖（P<0.01）。 结论 鹿茸提取物可显著促进大鼠关节软骨细胞增殖，制备液相色谱成功分离鹿茸提取物4个单独峰组分， 峰1 组分中的精胺是鹿茸提取物显著促进软骨细胞增殖的关键因子。