【目的】探究混合谱系激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein，MLKL)在小鼠皮肤伤口愈合过程中对巨噬细胞和成纤维细胞的影响及其调控机制。【方法】建立C57BL/6J小鼠和MLKL基因敲除(MLKL^-/-)小鼠皮肤创伤模型。采用免疫组化法检测小鼠皮肤损伤后MLKL的动态表达及巨噬细胞和成纤维细胞的募集情况。通过体外试验，建立成纤维细胞与M1/M2型巨噬细胞条件培养基(M1/M2 macrophages conditioned medium，M1/M2ø CM)共培养体系。通过Western blotting检测成纤维细胞中转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)、成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor 2，FGF-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)的蛋白表达情况。将M1/M2型巨噬细胞与成纤维细胞条件培养基(fibroblast conditioned medium，FBCM)共培养，通过ELISA检测M1型巨噬细胞中白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)分泌情况。通过ELISA和Western blotting分别检测M2型巨噬细胞中IL-10分泌量及精氨酸酶(Arginase)蛋白表达情况。【结果】免疫组化染色结果显示，C57BL/6J小鼠皮肤伤口愈合第3、5和7天均检测到MLKL阳性信号，MLKL表达水平随伤口愈合时间的延长而升高，且MLKL^-/-小鼠伤口周围CD86呈阳性的M1型巨噬细胞、CD163呈阳性的M2型巨噬细胞和Vimentin呈阳性的成纤维细胞的细胞数量少于C57BL/6J小鼠。在共培养体系中，与未处理组相比，C57BL/6J来源的M1ø CM和M2ø CM处理显著提高了成纤维细胞中TGF-β、FGF-2和MMP-9蛋白表达水平(P＜0.05)，而MLKL^-/-来源的M1ø CM和M2ø CM处理后，成纤维细胞中FGF-2和MMP-9蛋白表达量无显著变化(P＞0.05)，TGF-β蛋白表达量显著降低(P＜0.05)。C57BL/6J FBCM处理巨噬细胞后，M1型巨噬细胞中IL-6和TNF-α含量及M2型巨噬细胞中IL-10含量和精氨酸酶蛋白表达量均显著升高(P＜0.05)；MLKL^-/- FBCM处理巨噬细胞后，相关细胞因子含量及蛋白表达量均低于C57BL/6J FBCM处理组(P＜0.05)。【结论】MLKL可通过调控巨噬细胞和成纤维细胞的相互作用，影响巨噬细胞的募集和成纤维细胞的增殖能力，从而促进皮肤伤口愈合。

【目的】挖掘miR-200b生物学功能并探究其对小鼠卵泡发育的影响。【方法】利用NCBI数据库获取人、小鼠、大鼠、斑马鱼、猪和绵羊miR-200b成熟序列，通过在线软件WebLogo进行序列分析，利用TargetScan和miRDB软件预测小鼠miR-200b靶基因，并进一步对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析；通过腹腔注射miRNA antagomir构建小鼠miR-200b颉颃模型，采集小鼠血液及组织器官样本，利用实时荧光定量PCR检测卵巢中miR-200b表达水平；计算脏器系数，通过HE染色观察卵巢组织形态变化，并对卵泡进行计数；利用ELISA检测血清雌二醇(E₂)水平。【结果】不同物种miR-200b种子序列完全相同、成熟序列末端1～2个碱基存在差异；TargetScan和miRDB软件预测的共有靶基因共607个，其主要显著富集在转录调控、DNA和蛋白结合等GO条目，以及PI3K-Akt、MAPK、长寿调节、雌激素等KEGG信号通路。与Control和antagomir NC组相比，miR-200b颉颃组小鼠卵巢中miR-200b表达水平极显著下调(P＜0.01)，卵巢指数和腔前卵泡数极显著降低(P＜0.01)，有腔卵泡数极显著增多(P＜0.01)，同时伴随卵泡体积增大、颗粒细胞增多；血清雌二醇水平极显著升高(P＜0.01)。【结论】miR-200b对小鼠卵泡颗粒细胞生长及卵泡发育起负向调控作用，研究结果为深入剖析miR-200b对卵泡发育的调控功能提供了依据。

【目的】月桂酸甘油酯(glycerol monolaurate，GML)是月桂酸与甘油经酯化反应形成的单酯类化合物，具有抑菌活性，可作为提高动物饲料效率的潜在添加剂。试验旨在探究不同剂量GML对奶牛体外瘤胃发酵参数和甲烷产量的影响。【方法】采用体外发酵技术，以精粗比为4∶6的全混合饲粮(total mixed ration,TMR)为底物，设置0(对照组)、0.6%、1.2%、1.8% GML 4个添加水平，每个处理设置5个重复。于发酵0、6、12、24、48 h测定产气量，并在6、12、24、48 h采集瘤胃液和气体样品，分析产气量、气体成分比例及产量、瘤胃液发酵参数。【结果】①与对照组相比，发酵6 h时各GML试验组产气量均显著降低(P＜0.05)。发酵6和48 h时，产气量随GML添加量增加呈显著线性变化(P＜0.05)。②与对照组相比，甲烷、氢气、二氧化碳的比例在不同时间点均未受GML添加的影响(P＞0.05)；发酵6 h时，0.6%和1.2% GML组甲烷产量显著降低(P＜0.05)。发酵6 h时甲烷、氢气、二氧化碳产量及发酵48 h时二氧化碳产气量随GML添加量增加呈显著二次变化(P＜0.05)。③与对照组相比，不同时间点各GML试验组瘤胃液中总挥发性脂肪酸酸(TVFA)、乙酸、丙酸的比例及乙丙比均无显著变化(P＞0.05)。发酵6 h时，丁酸比例随GML添加量呈现显著二次变化(P＜0.05)。④与对照组相比，发酵6 h时，1.2% GML组的氨态氮(NH₃-N)浓度显著升高(P＜0.05)；发酵12 h时，1.2% GML组的NH₃-N浓度显著降低(P＜0.05)，而1.8% GML组的NH₃-N浓度则显著升高(P＜0.05)；发酵24 h时，各GML试验组的NH₃-N浓度均显著升高(P＜0.05)。各时间点各处理组间pH差异均不显著(P＞0.05)。发酵12 h时，NH₃-N浓度随GML添加量呈显著二次变化(P＜0.05)。【结论】在本试验条件下，添加0.6% GML可在发酵6～12 h显著降低产气量、甲烷产量和NH₃-N浓度，而对VFA组成和pH无显著影响，表明GML在合理添加水平下具备调控瘤胃发酵过程和抑制甲烷生成的应用潜力，为开发新型瘤胃甲烷减排添加剂提供理论依据。

【目的】研究复方中草药饲料添加剂对猪肠道菌群和肌肉代谢的影响，探索复方中草药饲料添加剂对育肥猪肉品质的作用机制。【方法】选取40头70日龄健康的杜大长三元杂交生长育肥猪(平均体重30 kg)，随机分为两组，每组4个重复，每个重复5头猪。对照组猪饲喂基础饲粮，中草药组猪饲喂含0.5%复方中草药超微粉的基础饲粮，记录每日投料量和剩余饲料量，并实时监测猪的健康状态，试验期120 d。通过16S rRNA高通量测序分析肠道菌群多样性，结合非靶向代谢组学技术筛选肌肉差异代谢物，并运用微生物-代谢物关联分析揭示潜在的互作机制。【结果】基于16S rRNA测序分析，共发现18 461个操作分类单元(OTUs)，中草药组有5 288个特有OTUs。肠道微生物群落分析结果表明，在门水平上，与对照组相比，中草药组猪肠道中厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度极显著降低(P＜0.01)，拟杆菌门(Bacteroidetes)相对丰度极显著升高(P＜0.01)，厚壁菌门/拟杆菌门值为5.03；在属水平上，对照组和中草药组猪肠道优势菌均为链球菌属(Streptococcus)，中草药组中普雷沃氏菌属(Prevotella)相对丰度极显著高于对照组(P＜0.01)。通过LDA和LEfSe分析，两组共筛选出36个差异菌群，与对照组相比，中草药组猪肠道中普雷沃氏菌属、未分类的拟杆菌目(unclassified_Bacteroidales)、颤螺菌属(Oscillospira)、考拉菌属(Phascolarctobacterium)、CF231的相对丰度明显升高。基于非靶向代谢组学分析，两组共筛选出48种差异代谢物，其中，丙氨酸-赖氨酸、马尿酸、硫酸吲哚酚等14种代谢物显著上调；亚油酸、2-羟基丁酸、二十碳烯酸等34种代谢物显著下调。微生物组学和代谢组学联合分析得出，差异菌属和肌肉差异代谢物间存在较强的相关性，其中，中草药组普雷沃氏菌属与马尿酸存在正相关，与2-羟基丁酸存在负相关。【结论】复方中草药饲料添加剂可通过调节肠道菌群结构和改善肌肉代谢，对育肥猪的肉质性状进行间接调控。普雷沃氏菌属、颤螺菌属是影响猪肉品质的关键特异性菌属，而马尿酸、2-羟基丁酸是调控猪肉品质的重要特异性代谢物。

在饲料禁抗政策全面实施的背景下，非营养性添加剂作为抗生素替代品在鹌鹑养殖中的应用研究日益受到关注。文章系统综述了植物提取物及其衍生物、益生菌、酶制剂、有机酸和抗菌肽5类非营养性添加剂在鹌鹑生产中的应用研究进展，其中，植物提取物及其衍生物通过调控动物消化吸收、免疫功能和抗氧化能力等多途径改善鹌鹑生产性能；益生菌通过调节肠道菌群平衡、增强肠黏膜屏障功能和提高免疫力等机制发挥作用；酶制剂主要通过降解抗营养因子、提高养分利用率来提高鹌鹑生产性能；有机酸通过降低胃肠道pH、抑制病原菌增殖等途径对鹌鹑健康产生积极影响；抗菌肽兼具直接抑菌和免疫调节双重功能。非营养性添加剂的应用可显著提高鹌鹑的生长性能、产蛋率及饲料转化率，改善肉、蛋品质，维护肠道健康。文章还探讨了不同添加剂的作用机制、适宜添加剂量及应用中存在的问题，并对未来研究方向进行了展望，以期为鹌鹑健康养殖和饲料添加剂研发提供理论参考。

【目的】探讨在兔饲粮中添加硒代蛋氨酸(selenomethionine，SeMet)对呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)致回肠氧化损伤和炎性损伤的影响，为DON中毒病的治疗提供一种新思路。【方法】将40只35日龄伊拉肉兔随机分为4组，分别为空白对照(CON)、模型(DON)、SeMet和DON＋SeMet组，每组10只。试验第1天开始，SeMet和DON＋SeMet组兔每天饲喂0.2 mg/kg SeMet，持续21 d。第15天，DON和DON＋SeMet组兔每天灌胃给予0.5 mg/kg BW DON，持续7 d。于试验第21天攻毒24 h后收集各组兔回肠组织，通过HE、PAS染色和扫描电镜观察回肠绒毛、隐窝形态、杯状细胞数量和超微结构变化；通过ELISA检测回肠组织氧化应激相关指标和炎性因子含量，利用实时荧光定量PCR检测回肠组织炎性相关基因表达量。【结果】与CON组相比，DON组兔回肠组织中少数肠绒毛发生断裂，绒毛高度和绒毛高度与隐窝深度比值显著降低(P＜0.05)，隐窝深度显著增加(P＜0.05)，杯状细胞数量显著减少(P＜0.05)；扫描电镜观察结果显示，DON组回肠绒毛表面萎缩，呈颗粒状，微绒毛脱落、断裂。与CON组相比，DON组兔回肠组织中白细胞介素-6(IL-6)含量显著升高(P＜0.05)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著降低(P＜0.05)，其他炎性因子(IL-10、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α))和氧化应激相关指标(丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和总抗氧化能力(T-AOC))均无显著差异(P＞0.05)。与DON组相比，饲粮添加SeMet可明显改善DON诱导的兔回肠病理损伤，回肠组织中IL-6含量显著降低(P＜0.05)。【结论】DON可诱导兔炎症反应，损伤回肠绒毛结构，而SeMet可缓解DON诱导的兔回肠绒毛断裂现象和炎症损伤。试验结果为SeMet干预DON诱导的肠道损伤提供形态学资料和理论依据，为DON中毒病的预防和治疗提供新的思路和方法。

随着生活水平的不断提高，消费者对牛肉品质的关注日益增强。转录组学(transcriptomics)和代谢组学(metabolomics)技术凭借其高通量、高灵敏度和系统性的优势，已成为研究牛肉质性状的强大工具。转录组学通过转录组测序(RNA-sequencing,RNA-Seq)技术并结合生物信息学方法揭示了基因的表达模式与肉质性状之间的关系。代谢组学的研究对象是生物体内分子质量＜1 500 u的内源性小分子，通过核磁共振(NMR)、气相色谱-质谱(GC-MS)和液相色谱-质谱(LC-MS)等技术对代谢物进行检测，并运用多变量技术、机器学习(ML)和功能分析等方法分析代谢物丰度和肉质性状之间的关系。转录组学和代谢组学联合分析可通过整合差异表达基因和差异代谢物进而研究基因表达模式与代谢物丰度之间的关系，利用基因-代谢物网络、两者共同富集的KEGG通路等方法全面解释肉质形成的内在差异及复杂性状背后的分子机制。文章系统综述了转录组学和代谢组学的技术原理、工作流程，以及两者在牛肉质性状研究中的应用现状，并探讨了当前研究所面临的挑战与未来发展的方向，以期为筛选优质肉牛分子育种标记、制定精准营养干预策略提供科学参考。

【目的】试验旨在研究不同周龄黑羽番鸭生长发育过程中盲肠微生物组成及分布特性。【方法】分别以3、5、7、9、11、13及43周龄黑羽番鸭为研究对象，公、母各随机选取5只，收集盲肠内容物，通过16S rRNA高通量测序，结合QIIME2和EasyAmplicon软件进行数据分析，选用LEfSe、STEM、PICRUSt2和Bugbase等软件对黑羽番鸭肠道微生物群落特征进行解析，以进行菌群分类和功能富集分析。【结果】多样性分析结果显示，3、5、7、13和43周龄黑羽番鸭盲肠菌群之间具有显著差异(P＜0.05)，但公、母黑羽番鸭盲肠微生物仅在13周龄时显示Ace指数存在显著差异(P＜0.05)。盲肠内容物组成分析结果显示，不同周龄黑羽番鸭门水平上的核心菌群包括拟杆菌门(53.77%)、厚壁菌门(26.92%)和脱硫杆菌门(5.38%)；属水平上的已知核心菌群包括拟杆菌属(27.47%)、理研菌科RC9肠道菌属(5.88%)、脱硫弧菌属(5.21%)和甲烷短杆菌属(3.46%)。进一步对属水平上平均丰度排名前30位的微生物群进行热图分析，结果显示，3与13～43周龄黑羽番鸭盲肠微生物之间具有较大差异。COG和KEGG功能富集分析发现，黑羽番鸭生长发育阶段盲肠微生物具有潜在功能的生物群主要集中在物质代谢和消化系统功能等方面。【结论】在黑羽番鸭发育过程中，其盲肠中以拟杆菌门、厚壁菌门和脱硫杆菌门占据主导地位，但黑羽番鸭盲肠微生物的结构和丰度会随周龄发生动态改变以适应生长发育需求，普雷沃氏菌属和瘤胃球菌科UCG-008菌属为3～13周黑羽番鸭生长发育调控过程中的关键菌属。试验结果为探究肠道微生物对黑羽番鸭生长发育特性的影响提供了新的见解。

短链脂肪酸(short-chain fatty acids，SCFAs)是由肠道微生物通过发酵膳食纤维和其他难消化的碳水化合物产生的代谢产物，具有抗菌、抗炎、抗癌、调节肠道微生物组成等生物学功能。SCFAs既可以与肠道微生物相互作用，参与微生物间的交流，调节肠道免疫系统，增强屏障功能，促进肠道稳态；又可以作为肠道微生物的代谢产物，穿透肠道屏障对动物机体产生影响。猪肉占世界肉类总销售量的30%，随着消费者对高品质猪肉需求的日益增长，如何生产出风味独特且肉质鲜美的优质猪肉产品，已成为生猪养殖行业高度关注的焦点。在畜牧业中，SCFAs对动物机体的作用主要体现在促进肠道健康及机体免疫调节等方面；随着肠道微生物与机体代谢关系的研究不断深入，SCFAs作为肠道-肌肉轴的重要媒介，通过影响肌纤维发育和肌内脂肪沉积从而调控猪肉品质的相关机制也越发清晰。文章对SCFAs的生物学功能及其与猪肉品质特征的关系进行了简要介绍，并对SCFAs通过肠-肌轴调控猪肌纤维转换和肌内脂肪沉积进而改善肉品质的研究进行了综述，旨在为SCFAs调控猪肉品质的研究和应用提供借鉴。

【目的】探究不同饲粮营养水平对围产期(产前60 d至羔羊断奶)双羔滩羊母羊及其羔羊生长性能、母羊养分表观消化率、血清生化指标、乳成分及瘤胃微生物的影响，以筛选母子一体化高效饲养体系最佳适宜饲粮方案。【方法】选用16只体况良好、体重相近(40.79 kg±1.26 kg)、2～3岁妊娠后期滩羊母羊，采用单因子随机设计分成4组，每组4只，分别饲喂4种不同营养水平的全价颗粒料，试验Ⅰ组为基础饲粮100%水平(代谢能8.00 MJ/kg，粗蛋白质13.10%)，试验Ⅱ组为基础饲粮115%水平(代谢能9.20 MJ/kg，粗蛋白质15.06%)，试验Ⅲ组为基础饲粮130%水平(代谢能10.40 MJ/kg，粗蛋白质16.93%)，试验Ⅳ组为基础饲粮145%水平(代谢能11.60 MJ/kg，粗蛋白质19.00%)。预饲期10 d，正试期125 d。试验结束后称母羊体重，羔羊出生后称羔羊初生重和平均日增重，并记录母羊发情时间；产前15 d开展母羊消化代谢试验，收集饲料、粪便和尿液，测定其养分表观消化率；在产前30 d、分娩日和产后30 d对母羊进行静脉采血，测定生化指标；于产后1、10、20、30和45 d采集羊乳样品，检测乳成分；产后7 d采集母羊瘤胃液，进行宏基因组测序。【结果】：①与试验Ⅰ组相比，试验Ⅲ和Ⅳ组母羊终末体重和羔羊初生重均显著增加(P＜0.05)，羔羊断奶日龄显著减小(P＜0.05)，且试验Ⅲ与Ⅳ组间上述指标差异不显著(P＞0.05)。②母羊干物质、粗蛋白质、有机物、粗脂肪、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维表观消化率随着营养水平提高呈上升趋势；试验Ⅳ组母羊干物质、有机物和粗脂肪表观消化率显著高于试验Ⅰ组(P＜0.05)，母羊粗蛋白质表观消化率显著高于试验Ⅰ和Ⅱ组(P＜0.05)。③分娩日，与试验Ⅱ组相比，试验Ⅲ组母羊血清总胆固醇含量显著增加(P＜0.05)；产前30 d，与试验Ⅰ组相比，试验Ⅲ组母羊血清甘油三酯含量显著增加(P＜0.05)，试验Ⅳ组母羊血清葡萄糖含量显著增加(P＜0.05)；与试验Ⅲ组相比，试验Ⅳ组母羊血清总蛋白含量显著增加(P＜0.05)。④各试验组间母羊初乳与常乳中乳蛋白、乳糖、全乳固体和乳尿素氮含量均无显著差异(P＞0.05)，乳脂率随营养水平提高呈上升趋势。⑤瘤胃微生物多样性分析显示，试验Ⅳ组母羊瘤胃液的香侬指数(Shannon index)显著高于试验Ⅲ组(P＜0.05)；主坐标分析(PCoA)显示，各试验组瘤胃微生物区系有显著差异(P＜0.05)；门水平上，与试验Ⅰ和Ⅳ组相比，试验Ⅲ组瘤胃中拟杆菌门丰度提高，厚壁菌门丰度降低；属水平上，与试验Ⅰ和Ⅳ组相比，试验Ⅲ组瘤胃液的拟杆菌属(unclassified_o_Bacteroidales)、普雷沃菌属(Prevotella)和瘤胃球菌属(Ruminococcus)丰度提高。KEGG(第三层级)富集分析显示，与试验Ⅰ和Ⅳ组相比，试验Ⅲ组氨基酸和核苷酸糖代谢、柠檬酸循环、其他聚糖降解、鞘脂代谢、叶酸生物合成、谷胱甘肽代谢、缬氨酸/亮氨酸/异亮氨酸降解、维生素B₆代谢和糖胺聚糖降解等代谢通路显著富集(P＜0.05)；与试验Ⅰ和Ⅳ组相比，试验Ⅲ组糖基转移酶、糖苷水解酶家族和参与能量代谢的碳水化合物活性酶相对丰度显著提高(P＜0.05)。【结论】在本试验条件下，产前60 d至羔羊断奶的双羔滩羊母羊的最佳饲粮营养水平的代谢能和粗蛋白质水平分别为10.40 MJ/kg和16.93%。

【目的】从马乳清蛋白水解产物中分离鉴定对血管紧张素转换酶(ACE)、二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)和α-葡萄糖苷酶(AG)具有多重抑制活性的多肽。【方法】自新疆乌鲁木齐南山牧场采集15份生马乳样品，以马乳清蛋白为底物，分别用单酶(胰蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶)、双酶(胰蛋白酶＋中性蛋白酶)和三酶(胰蛋白酶＋中性蛋白酶＋碱性蛋白酶)进行水解，通过超滤法对水解产物进行分离；通过测定ACE抑制活性评价各级分离产物的降血压活性，通过测定AG抑制活性和DPP-Ⅳ抑制活性评价各级分离产物的降血糖活性；通过液质联用(LC-MS/MS)的方法鉴定多肽的氨基酸组成，根据鉴定结果化学合成活性较好的多肽，并体外测定其抑制活性。【结果】与单酶、双酶水解产物相比，三酶水解产物的水解度(74.33%)、ACE抑制活性(22.81%)、DPP-Ⅳ抑制活性(23.46%)及AG抑制活性(20.77%)均显著提高(P＜0.05)。从活性最优的三酶水解产物中分离鉴定出具有多重抑制活性的新型多肽系列(HSVAMAASDISLLDSESAPLR、TQMVDEEIMEK、VQIVPDLTR、RALQPLPGRVQIVPDLTR、TELTEEEKNYLK、LRPTPEDNLEIILR)；体外化学合成这几种多肽，并测定其活性，结果显示，TQMVDEEIMEK对ACE抑制率达99.89%，VQIVPDLTR对DPP-Ⅳ抑制率达90.85%，TELTEEEKNYLK对AG抑制率达97.87%。【结论】本研究从马乳清蛋白水解产物中成功分离鉴定出6种具有ACE、DPP-Ⅳ、AG多重抑制活性的新型多肽，为马乳功能性产品的开发提供了理论依据。

【目的】试验旨在研究复方中药超微粉对产蛋后期蛋鸡免疫性能的影响。【方法】选取307日龄的新杨黑蛋鸡216只，随机分为3组，每组8个重复，每个重复9只。对照组饲喂基础饲粮，试验组分别在基础饲粮中添加0.5%丹参＋0.25%女贞子＋0.25%蒲公英(复方1)、0.3%益母草＋0.2%丹参＋0.25%女贞子＋0.25%蒲公英(复方2)超微粉。于试验第120天采集血液、输卵管和肝脏组织，测定免疫指标及相关基因表达。【结果】与对照组相比，复方1组蛋鸡输卵管白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著降低、输卵管γ-干扰素(IFN-γ)的mRNA表达量显著增加(P＜0.05)；复方2组蛋鸡输卵管IL-2、脾脏TNF-α的mRNA表达量显著降低(P＜0.05)；复方1和2组蛋鸡血浆IL-6和TNF-α含量，以及输卵管IL-1β和TNF-α及脾脏IL-1β和核因子-κB(NF-κB)的mRNA表达量均显著降低(P＜0.05)，血浆IL-10含量及输卵管IL-10的mRNA表达量均显著增加(P＜0.05)。【结论】饲粮中添加由益母草、丹参、女贞子和蒲公英组成的复方中药超微粉可通过增加血浆、输卵管和脾脏免疫细胞因子活性、激活输卵管及脾脏相关免疫信号通路来增强产蛋后期蛋鸡的免疫性能，且两个复方对机体免疫性能的调控作用均具有靶标特异性。

【目的】研究饲粮中添加由黄芪、甘草、苦豆子组成的中草药水提物复配剂对育肥滩羊羔羊瘤胃碳水化合物降解酶活性、微生物组成的影响。【方法】采用单因素设计，选择32只3月龄、体重25 kg左右且健康的育肥滩羊公羔，随机分为4组，对照组(k0)、试验1组(s1)、试验2组(s2)和试验3组(s3)，每组8只羊，分别饲喂含有0、0.50%、1.00%和1.50%的中草药水提物复合制剂的基础饲粮，预饲期10 d，试验期60 d。试验结束时采集瘤胃液，测定瘤胃碳水化合物降解酶活性；利用宏基因组测序分析瘤胃微生物组成和功能。【结果】各组间育肥滩羊羔羊瘤胃羧甲基纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、微晶纤维素酶活性均无显著差异(P＞0.05)，试验3组育肥滩羊羔羊瘤胃中的淀粉酶和纤维素二糖酶活性较对照组显著提高(P＜0.05)。物种组成分析结果表明，假单胞菌门(Pseudomonadota)、拟杆菌门(Bacteroidota)和芽孢杆菌门(Bacillota)为育肥滩羊羔羊瘤胃主要优势菌门，琥珀酸弧菌属(Succinivibrio)、普雷沃菌属(Prevotella)、木聚糖杆菌属(Xylanibacter)为育肥滩羊羔羊瘤胃主要优势菌属。物种基因KEGG功能注释显示，育肥滩羊羔羊瘤胃碳水化合物代谢途径活跃。通过物种基因碳水化合物活性酶(CAZy)基因表达谱差异分析发现，在最高层级(level 1)中，碳水化合物结合模块酶基因(CBMs)丰度有显著变化(P＜0.05)，第二层级(level 2)的碳水化合物结合模块酶家族基因(CBM14、CBM77、CBM13)、糖苷水解酶家族基因(GH31)和碳水化合物酯酶家族(CE0)基因丰度发生显著改变(P＜0.05)，试验3组的CBM77、CBM13和CE0基因丰度较对照组显著提高(P＜0.05)。瘤胃碳水化合物降解酶活性与瘤胃CAZy第二层级差异基因丰度相关分析结果显示，木聚糖酶活性与CE0家族基因丰度显著负相关(P＜0.05)；淀粉酶活性与CBM13家族基因丰度显著正相关(P＜0.05)，与CE0家族基因丰度极显著正相关(P＜0.01)；纤维素二糖酶活性与CBM77家族基因丰度极显著正相关(P＜0.01)。【结论】饲粮添加1.50%由黄芪、甘草、苦豆子组成的中草药水提物复配剂，可提高育肥滩羊羔羊淀粉酶和纤维素二糖酶的活性及与之正相关的碳水化合物相关功能基因(CBM13、CE0和CBM77)的丰度，有助于瘤胃饲料中淀粉和纤维素成分的降解，一定程度改善瘤胃发酵特性。

胱氨酸是由两个半胱氨酸通过二硫键氧化连接形成的氨基酸，其不仅是合成蛋白质的关键构件，也是畜禽重要的营养性硫源，对维持机体稳态和生理功能至关重要。适宜水平的胱氨酸有助于畜禽生长发育，改善畜禽产品质量。研究表明，胱氨酸功能的发挥高度依赖于其在细胞内外的高效转运与动态平衡，一旦转运失衡，则可能引发机体脏器损伤等一系列代谢问题。胱氨酸的转运依赖于细胞膜蛋白质溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11，SLC7A11)蛋白以及溶酶体膜转运载体蛋白Cystinosin，其转运过程与细胞氧化-抗氧化平衡以及铁死亡密切相关。然而，现有研究对细胞感应胱氨酸浓度变化的过程，胞内外胱氨酸转运体的作用机制及其营养干预策略研究尚存不足。在全球推进低蛋白质饲粮的背景下，高效利用包括胱氨酸在内的氨基酸资源以减少氮排放具有重要意义。因此，笔者系统梳理了胱氨酸在畜禽生产中的应用效果及转运机制，归纳总结了胱氨酸在畜禽营养代谢中的调控作用，探讨了胱氨酸转运的机制及其转运障碍导致的营养代谢问题，以期为探明胱氨酸的作用机制，及完善胱氨酸的精准营养方案提供借鉴。

【目的】本试验旨在研究鸡蛋不同质地钙化壳的特性。【方法】选用420日龄笼养海兰灰蛋鸡所产粉色的正常蛋、全身布满颗粒钙的沙壳蛋(沙壳蛋A)、钝端钙粒集中的沙壳蛋(沙壳蛋B)和钝端分布多条明暗相间螺旋条纹的环形蛋各36枚进行蛋壳品质、蛋壳粗灰分和钙磷含量测定及蛋壳超微结构观察。【结果】①沙壳蛋和环形蛋的蛋壳强度显著低于正常蛋(P＜0.05)；沙壳蛋和环形蛋蛋壳强度存在显著差异(P＜0.05)，表现为沙壳蛋A＞环形蛋＞沙壳蛋B。②沙壳蛋和环形蛋钙化壳无机物含量显著低于正常蛋(P＜0.05)；沙壳蛋和环形蛋钙化壳无机物含量存在显著差异(P＜0.05)，表现为沙壳蛋A＞沙壳蛋B＞环形蛋；不同质地钙化壳有机物含量与无机物含量呈相反趋势。③环形蛋蛋壳钙含量显著低于沙壳蛋和正常蛋(P＜0.05)；蛋壳钙含量在沙壳蛋和正常蛋之间差异不显著(P＞0.05)。④蛋壳磷含量表现为正常蛋＞沙壳蛋A＞环形蛋＞沙壳蛋B。⑤环形蛋钙化壳乳突层厚度显著低于沙壳蛋和正常蛋(P＜0.05)。⑥正常蛋蛋壳有效层强度显著高于沙壳蛋和环形蛋(P＜0.05)；沙壳蛋B和环形蛋的蛋壳有效层厚度显著低于沙壳蛋A(P＜0.05)；沙壳蛋B和环形蛋之间蛋壳有效层厚度差异不显著(P＞0.05)。⑦主成分分析与相关性分析结果显示，影响蛋壳强度的关键指标为乳突层厚度与钙含量。【结论】沙壳蛋和环形蛋的蛋壳强度显著低于正常蛋；在蛋壳厚度和有效层厚度相近的情况下，钝端钙粒集中的沙壳蛋蛋壳强度最差；乳突层厚度和钙含量是影响蛋壳强度的主要因素。

【目的】研究补饲包被胍基乙酸(CGAA)对冷季放牧妊娠中后期哈萨克母羊生产性能、血清生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响，为CGAA在反刍动物养殖中的应用提供参考。【方法】选取妊娠第90～100天、体重相近(47.80 kg±0.30 kg)的健康放牧哈萨克母羊60只，随机分为4个处理组，每组15个重复。每只羊每天补饲混有CGAA(对照组0 g、试验Ⅰ组0.6 g、试验Ⅱ组1.2 g和试验Ⅲ组1.8 g)的精料500 g。在补饲条件下饲喂37 d，其中预饲期7 d，试验期30 d。试验期间测定母羊的生产性能(初始体重、终末体重、平均日增重及羔羊初生重)，并从每个处理组中随机选择10只母羊颈静脉采血，测定其血清生化、抗氧化和免疫指标。【结果】试验Ⅱ和Ⅲ组的母羊平均日增重极显著高于对照组和试验Ⅰ组(P＜0.01)；羔羊的初生重和母羊的平均日采食量均显著高于对照组(P＜0.05)。与对照组相比，试验Ⅲ组母羊血清甘油三酯含量显著降低(P＜0.05)；试验Ⅱ组母羊血清尿素氮含量、肿瘤坏死因子含量和谷草转氨酶活性极显著降低(P＜0.01)，肌酐和肌酸含量、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性、总抗氧化能力及胰岛素生长因子水平均极显著增加(P＜0.01)，孕酮和皮质醇水平显著降低(P＜0.05)；试验Ⅰ和Ⅱ组母羊血清L-精氨酸和一氧化氮含量均极显著增加(P＜0.01)。【结论】在放牧条件下，补饲CGAA可提高妊娠中后期哈萨克羊母羊的平均日增重和羔羊的初生重；可增强母羊机体抗氧化能力和免疫功能，降低皮质醇等激素的分泌水平。建议妊娠中后期哈萨克羊母羊补饲1.2 g/d CGAA为宜。

铬作为动物机体所必需的微量元素之一，其主要以三价铬的形式发挥生物学功能。铬主要分为有机铬和无机铬两类，无机铬因其吸收率低、易受其他饲料成分的影响，故应用效果存在限制。而有机铬作为一种营养性补充剂，具有提高胰岛素敏感性、调节动物机体血糖水平、参与脂质代谢、增强机体抗氧化应激能力等生物学功能，在促进动物生长、改善生产性能和繁殖性能，及增强动物机体抗氧化应激能力等方面发挥重要作用。在猪生产中，有机铬可改善其生长性能，降低背膘厚度，提高瘦肉率，改善猪肉品质；在反刍动物生产中，有机铬可缓解环境应激对动物的影响，改善乳品质和肉品质；在鸡生产中，有机铬可提高其生产性能，增强机体抗氧化能力，降低死亡率。笔者概述了有机铬的类型及其吸收代谢方式，对有机铬的生物学功能及其在不同动物饲粮中的应用进展进行了综述，旨在为有机铬在畜牧生产中的合理应用和深入研究提供参考。

【目的】挖掘下丘脑-垂体轴中猪卵巢囊肿相关候选基因，从神经内分泌系统揭示猪卵巢囊肿的遗传机制。【方法】利用Illumina高通量测序技术分别对3头卵巢囊肿和3头正常发情母猪的下丘脑和垂体进行转录组测序，筛选差异表达基因，并对差异表达基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。利用实时荧光定量PCR对下丘脑和垂体中12个差异表达基因表达量进行检测，以验证转录组测序数据的可靠性。【结果】与正常发情母猪相比，在卵巢囊肿母猪下丘脑中共有283个基因存在差异表达，其中173个基因表达下调，110个基因表达上调；在卵巢囊肿母猪垂体中共有1 149个基因存在差异表达，其中563个基因表达下调，586个基因表达上调。基于差异表达基因的表达量、差异倍数及功能富集分析等结果，POMC、KISS1、PMCH、PRLH、VIP、NTRK1、TAC3可能是下丘脑中与猪卵巢囊肿相关的重要候选基因；MC3R、SSTR3、FSHB、OXT、PRL、TSHB、LHB、TAC1可能是垂体中与猪卵巢囊肿相关的重要候选基因。G-蛋白偶联受体信号通路、激素活性、跨膜信号受体活性、神经活性配体-受体相互作用、甲状腺激素合成及ECM受体相互作用等信号通路可能对猪卵巢囊肿的发生起重要作用。实时荧光定量PCR验证的差异基因表达趋势与转录组测序结果基本一致。【结论】转录组测序结果表明，下丘脑中POMC、KISS1、PMCH等基因及垂体中MC3R、SSTR3、FSHB等基因可能是猪卵巢囊肿相关重要候选基因；G-蛋白偶联受体信号通路、激素活性、跨膜信号受体活性等通路可能在猪卵巢囊肿病理过程中起重要作用。研究结果为从神经内分泌系统解析猪卵巢囊肿的遗传机制提供了重要的数据支撑。

【目的】西藏特有牛种樟木牛濒临灭绝，本研究旨在采用体细胞核移植技术开展抢救性保护，为高海拔地区濒危物种保护提供新的途径。【方法】采用酶消化法建立樟木牛耳缘成纤维细胞，通过体细胞核移植技术制备重构胚胎，并移植至代孕母牛进行体内发育。采集流产个体组织进行亚硫酸氢盐测序，对父系表达基因10-ε肌聚糖(paternally expressed gene 10-sarcoglycan epsilon，PEG10-SGCE)、胰岛素样生长因子2-H19印迹母源表达转录本(insulin-like growth factor 2-H19 imprinted maternally expressed transcript，IGF2-H19)和鸟苷酸结合蛋白α亚基(guanine nucleotide-binding protein alpha subunit，GNAS)印迹域开展甲基化分析。【结果】本研究成功制备核型正常的樟木牛耳缘成纤维细胞，作为体细胞核移植供体细胞。移植32枚体细胞核移植囊胚至21头代孕母牛子宫，其中12头受孕成功，5头发育到期并成功诞下克隆牛。短串联重复序列分析发现，克隆牛的核DNA与供体牛成纤维细胞的核DNA完全匹配。对妊娠270 d发生流产的2头胎儿进行分析发现，PEG10-SGCE、IGF2-H19和GNAS印迹域在流产胎儿胎盘中呈现高甲基化，且GNAS印迹域在流产胎儿不同的组织中则呈现或低或高甲基化的异常状况。【结论】体细胞核移植技术能够应用于濒危樟木牛的抢救性保护。

【目的】试验旨在系统分析鸡节律相关基因家族，探究鸡在持续黑暗条件下松果体内源性节律基因的表达规律，并分析鸡松果体部分节律基因在胚胎后期到育雏初期的表达模式。【方法】通过查询InterPro数据库，获取多种节律相关基因家族序列，构建系统进化树，分析其蛋白理化性质、保守结构域、顺式作用元件等。基于转录组数据，采用RAIN算法与PSEA分析内源性节律基因的表达特征，并采用实时荧光定量PCR分析不同阶段燕山红玉鸡与巴布考克B380鸡松果体中节律基因的表达模式。【结果】共鉴定到7个节律相关基因家族(PER、CRY、CLOCK、BMAL、ROR、TIMELESS、OPN4)。系统进化树显示，CLOCK与BMAL基因在进化中较为接近。染色体定位分析发现，各基因家族成员分散分布在不同染色体上，仅发现OPN4与RRH基因存在串联重复。蛋白理化性质分析显示，PER3和TIMELESS蛋白分子质量＞130 ku，其他家族成员蛋白分子质量＜100 ku。OPN4及其亚型OPN4-1为疏水性且含7次跨膜结构域(7tm_GPCRs)，而其他蛋白均为亲水性且无跨膜结构域。RAIN算法结果显示，CRY1与CRY2基因的表达相位存在明显差异，且二者启动子区转录因子结合位点及密度存在差异。PSEA分析结果发现，在持续黑暗的条件下，主观夜高表达基因CRY2、PER3参与昼夜节律调控及损伤DNA结合、能量代谢、脂质代谢等通路；主观日高表达基因CLOCK、ARNTL、CRY1则参与节律基因转录激活、DNA修复及损伤响应等通路。实时荧光定量PCR结果显示，CRY2、PER2和CLOCK基因表达水平在出雏第1天主观日2 h较孵化第19天显著上调(P＜0.05)，随后在出雏第10天较出雏第1天显著下调(P＜0.05)；而TIMELESS和OPN4基因表达水平均较前一阶段持续显著上调(P＜0.05)。【结论】鸡节律相关基因家族在染色体上分布较为分散，OPN4与RRH基因存在串联重复，CRY基因表达相位差异可能受启动区调控元件影响。出雏第1天，光照刺激可能显著上调雏鸡松果体CRY2、PER2等核心节律基因表达；至出雏第10天，生物钟调控网络趋于成熟。

随着人们生活质量的提升，对肉类质与量的需求也随之增加。中国地方猪种资源丰富，在经长期自然和人工选择，形成了适应性强、肉品质优、耐粗饲、抗逆性好等优良特性，是培育优质新品种(系)的优良育种素材。杂交改良是育种学家们在猪生产上提高经济价值的一种常用技术，一直以来，常通过国外瘦肉型猪种与地方猪种进行杂交，从而获得兼顾地方猪优良肉品质特色及外种猪高产肉性能的品种或品系。近年来，组学分析技术的飞速发展促进了对肉品质差异更深层次的探究，且多组学数据可对造成差异的复杂调控网络进行综合分析，从而更准确地解释调控机制。笔者简述了地方猪种与引进猪种杂交改良前后的肉品质性状差异，并结合多组学及肠道微生物组学技术总结了在肉品质方面的研究进展，分析了造成肉品质差异的调控机制，以期为地方猪种改良体系的搭建提供参考。

【目的】分析石潭鸡与中国其他地方鸡种线粒体DNA(mtDNA)基因序列的密码子使用模式及特性，探究石潭鸡与中国主要地方鸡种的进化关系。【方法】获取10只健康成年石潭鸡的mtDNA基因序列，采用CodonW 1.4.2软件分析其与中国17个地方鸡种mtDNA基因密码子使用偏好性，计算密码子偏好参数，并进行偏好性密码子的聚类分析、氨基酸分析、因子相关性及基因序列的聚类分析。【结果】石潭鸡与中国主要地方鸡种的mtDNA序列均倾向于使用以C碱基结尾的密码子，而以G碱基结尾的密码子使用频率较低。石潭鸡以CGA、CUA、ACC、UUC等27个密码子的相对密码子使用度(RSCU)均＞1，为偏好性密码子。石潭鸡与桃源鸡、五华三黄鸡、广西三黄鸡、如皋黄鸡、海南文昌鸡、河田鸡和皖南三黄鸡的密码子偏好性相近，进一步选取上述7个鸡种展开分析，明确石潭鸡与该群体在遗传层面的关联特征，氨基酸组成分析显示，石潭鸡线粒体中亮氨酸含量最高，其次为异亮氨酸和苏氨酸，8个鸡种以AC和GU结尾的密码子呈现明显分化，且AC结尾密码子的含量较高。基于mtDNA基因序列的聚类分析发现，石潭鸡与如皋黄鸡的亲缘关系最近。【结论】石潭鸡与中国主要地方鸡种mtDNA序列均表现出以C碱基结尾密码子的显著偏好，且AC结尾的密码子含量相对较高；石潭鸡线粒体中亮氨酸含量最高，与如皋黄鸡的亲缘关系最近。

【目的】试验旨在建立一套基于猪MⅡ期卵母细胞胞质颜色及第一极体形态的分级和评价标准，系统分析不同等级卵母细胞的形态学特征及其对胚胎发育能力的影响，从而提高成熟优质卵母细胞的筛选效率，提升体细胞核移植(SCNT)胚胎的发育潜力，为畜牧业中SCNT技术的应用提供科学依据。【方法】采集体外成熟的猪MⅡ期卵母细胞，根据胞质颜色(黑色致密或白色颗粒感)及第一极体形态(完整圆形或碎裂长条形)将卵母细胞分为A、B、C、D 4个等级。利用显微镜测量卵母细胞胞质直径，采用phalloidin-FITC染色检测微丝分布与表达，通过BODIPY染色评估脂滴大小与数量，并采用α-tubulin-TRITC染色观察纺锤体形态及异常率。通过电激活进行孤雌激活(PA)培养，计算卵裂率、囊胚率及凋亡率。采用近交系猪胎儿成纤维细胞作为供体，构建SCNT胚胎，评价各等级卵母细胞发育能力。【结果】A级猪卵母细胞占比最高(28.60%)，胞质直径(117.57 μm)显著大于C、D级卵母细胞(P＜0.05)；微丝表达适中(85.85 A.U.)，纺锤体异常率最低(24.56%)；PA和SCNT胚胎的囊胚率(52.37%和30.80%)最高，且囊胚细胞数量最多(63.73个)，均显著优于D级卵母细胞(P＜0.05)。B级猪卵母细胞的胞质直径最大(117.67 μm)，显著优于C、D级卵母细胞(P＜0.05)；微丝表达和小脂滴占比最高(88.72 A.U.和44.07%)，但囊胚凋亡率最低(87.12 A.U.)；PA胚胎的卵裂率和囊胚率显著低于A级卵母细胞(P＜0.05)。C、D级猪卵母细胞的胞质颜色较浅，脂滴较大，纺锤体异常率较高，PA及SCNT胚胎的囊胚率明显降低。【结论】通过对猪MⅡ期卵母细胞进行形态学分级，结合多种细胞质量指标和发育能力评价，证实胞质颜色致密、第一极体完整的A级卵母细胞具备较高的发育潜力。该形态学质量分级体系为猪卵母细胞的筛选提供了可靠、非侵袭性的评价标准，有助于优化SCNT克隆技术的应用效果，推动猪克隆技术在畜牧生产中的发展。

随着中国畜牧业的快速发展，繁殖率高、生产效率高和适应性强的家畜在养殖经济效益和品种选育上具有显著优势。人工授精技术作为家畜快速扩繁的关键一环，可有效地将优质种畜的遗传信息传递下去。精液保存技术是扩大人工授精的基础，可延长精子体外存活时间，提高良种公畜的利用率。目前常用的精液保存方法有超低温冷冻保存、常温保存和低温保存3种方式。常温保存可用于短期运输；超低温冷冻则侧重长期保存；而低温保存技术使精液不受时间、地域和种畜自身发育特点影响，从而加强了不同品种间的遗传交流。低温保存稀释液通过添加卵磷脂等抗氧化物质，有效减缓低温保存过程中对精子造成的氧化损伤，提高人工授精后母畜的受胎率。文章系统总结了家畜精液低温保存稀释液的关键添加物，以及精子能量代谢的主要途径，分析了低温条件下精子代谢变化及其机制，旨在为深入了解精子代谢、研发高效稀释液提供理论支撑，进而为家畜规模化养殖、品种改良、推进育种和提高经济效益做出贡献。

【目的】试验旨在分析味觉受体TAS1R1基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与贵州地方猪生长性状的关联性，为猪遗传育种提供有效的遗传标记和理论依据。【方法】采集262头贵州地方猪(从江香猪、江口萝卜猪、白洗猪、关岭猪、黔东花猪)耳组织样进行DNA提取，利用Primer Premier 6.0软件设计9对TAS1R1基因特异性引物，经PCR扩增后测序。使用DNAStar软件中SeqMan程序确定SNP位点，利用SHEsis在线软件分析SNP位点的群体遗传特性，采用SPSS 25.0软件中一般线性模型(GLM)对TAS1R1基因SNP位点与贵州地方猪生长性状进行关联分析，并结合RNAfold web server在线软件对TAS1R1基因SNP位点突变前后的mRNA二级结构进行预测。【结果】本研究筛选出2个SNP位点：g.67401632 G＞C(外显子3)和g.67404545 C＞T(外显子5)，均为错义突变，分别引起缬氨酸转变为亮氨酸及苏氨酸转变为甲硫氨酸。基因型分析结果显示，g.67401632 G＞C和g.67404545 C＞T位点的优势基因型均为CC。遗传多样性分析显示，g.67401632 G＞C位点在从江香猪、关岭猪和黔东花猪中表现为中度多态(0.25＜PIC＜0.50)，而在江口萝卜猪和白洗猪中表现为低度多态(PIC＜0.25)；g.67404545 C＞T位点在白洗猪中呈现低度多态。χ²检验结果显示，关岭猪g.67401632 G＞C位点符合哈代-温伯格平衡状态(P＜0.01)，而其他猪种g.67401632 G＞C和g.67404545 C＞T位点均偏离哈代-温伯格平衡状态(P＞0.05)。关联分析结果显示，8月龄从江香猪g.67401632 G＞C位点CC基因型个体的体长显著大于CG基因型(P＜0.05)，江口萝卜猪g.67401632 G＞C位点CG基因型个体的体长显著高于CC基因型(P＜0.05)；在1～5月龄从江香猪和黔东花猪中未发现SNP位点与体尺指标存在显著关联(P＞0.05)。二级结构预测结果显示，g.67401632 G＞C和g.67404545 C＞T位点增强了TAS1R1基因mRNA的二级结构稳定性。【结论】本研究共发现了2个错义突变，分别为g.67401632 G＞C(外显子3)、g.67404545 C＞T(外显子5)，其中g.67401632 G＞C位点与贵州地方猪生长性状存在一定的关联性，表明TAS1R1可作为猪遗传育种中生长性状的候选基因。

【目的】本研究旨在对中国7个代表性地方山羊品种群体结构和优先保护次序进行分析，以促进山羊遗传资源保护和养羊业的可持续健康发展。【方法】收集了中国7个地方山羊品种,包括西藏山羊、内蒙古绒山羊、辽宁绒山羊、湘东黑山羊、海南黑山羊、贵州黑山羊和罗平黄山羊，共63个个体的Illumina 50K芯片数据。通过主成分分析(PCA)、系统进化树和Admixture分析来了解群体结构，利用R Studio软件对PCA分析和Admixture分析结果进行可视化，利用在线网站iTOL对系统进化树进行可视化；将7个代表性品种整合为一个元种群，分析去除每个品种后总基因多样性和总等位基因多样性的变化，通过模拟评估各品种对合成群体在基因多样性和等位基因多样性方面的贡献比例确定品种保护的优先次序。【结果】群体结构分析中，PCA结果和系统进化树结果显示，7个品种明显分为3个分支，分别为西部&北部分支、东南分支和西南分支。西部&北部分支包括辽宁绒山羊、内蒙古绒山羊和西藏山羊；东南分支包括湘东黑山羊和海南黑山羊；西南分支包括贵州黑山羊和罗平黄山羊。Admixture分析结果显示，当K=3时，种群分布结构最佳。优先保护次序分析中，综合基因多样性和等位基因多样性的Z-score标准化结果表明，7个地方品种的优先保护次序从高到低依次为辽宁绒山羊、贵州黑山羊、西藏山羊、湘东黑山羊、内蒙古绒山羊、海南黑山羊、罗平黄山羊。【结论】中国地方山羊可分为3个分支，其中辽宁绒山羊、贵州黑山羊和西藏山羊为优先保护品种。本研究结果可为中国地方山羊遗传资源的管理提供依据，同时为中国地方山羊保护政策的优化提供参考。

猪体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer，SCNT)是将猪的体细胞核移植到去核卵母细胞中，通过激活重构胚胎使其发育为新个体的无性繁殖技术，在生产克隆猪及推动畜牧育种与生物医学研究方面起着重要作用，但猪体细胞核移植的供体细胞和受体卵母细胞选择与培养的复杂性、克隆效率低等原因导致其移植效率低下(＜5%)。作者系统综述了提高猪体细胞核移植效率的策略：①精准去核技术，如通过激光辅助、偏振光显微术等提高去核率；②供体细胞与卵母细胞优化，如低传代胎儿成纤维细胞、细胞周期同步化、动态激素组合培养等；③融合与激活方法创新，如电融合参数优化、锌离子调控等；④表观遗传挽救，如过表达重编程因子MBD3、抑制H3K9 me3修饰等。未来需要通过多技术协同(如代谢调控联合表观修饰)进一步突破发育效率瓶颈，推动猪克隆技术在畜牧生产与异种器官移植中的产业化应用。

【目的】构建A型流感病毒(Influenza A virus，IAV)聚合酶酸性蛋白(polymerase acidic protein,PA)的特异性纳米抗体(nanobody,Nb)噬菌体展示文库，获得广谱特异性识别PA蛋白的纳米抗体，为IAV基础研究和应用研究提供生物材料。【方法】构建真核表达IAV PA的重组质粒，使用Flag标签抗原特异抗体亲和层析法获得纯化蛋白，并以此作为免疫原与弗氏佐剂混合，对羊驼进行免疫。第5次免疫14 d后，采用间接ELISA检测羊驼血清中针对PA蛋白的抗体效价。从羊驼外周血中分离出淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)，提取总RNA后反转录成cDNA，利用巢式PCR技术扩增重链抗体的重链可变区(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody,VHH)基因，构建pComb-VHH噬菌体重组质粒并电转化大肠杆菌SS320感受态细胞，构建纳米抗体噬菌体展示文库，同时测定该文库库容量及多样性。使用PA蛋白包被酶标板，淘选获得与PA蛋白反应的纳米抗体阳性克隆。对淘选获得的阳性克隆进行测序及真核表达，通过Western blotting、间接免疫荧光试验鉴定纳米抗体特异性。【结果】经测序验证，获得序列正确的pcDNA3.1-Flag-PA真核表达重组质粒，表达并纯化获得PA蛋白作为免疫原对羊驼进行免疫。经5次免疫后，羊驼血清中针对PA蛋白的抗体效价达到1∶64 000；成功扩增出VHH基因并构建重组率为100%、序列多样性为90%、库容量为6.5×10⁷ CFU/mL的纳米抗体噬菌体展示文库。经过3轮富集淘选，获得6株功能区序列不同的PA蛋白纳米抗体，分别为Nb13、Nb14、Nb16、Nb20、Nb42和Nb72，其中纳米抗体Nb16可广谱特异性识别不同亚型IAV的PA蛋白。【结论】本研究成功构建 IAV PA蛋白纳米抗体噬菌体展示文库，筛选获得1株广谱特异性识别 IAV PA蛋白的纳米抗体。

【目的】研究ZBED6基因敲除对巴马香猪肺脏基因表达谱的影响，进一步明确ZBED6基因缺失对巴马香猪肺脏功能的影响。【方法】采集8月龄雌性野生型(WT)和ZBED6基因敲除型(ZBED6-KO)巴马香猪肺脏组织并称重，用Trizol法提取肺脏组织RNA，经质量检测后建库(NEBNext^® Ultra^TM)并测序(Illumina HiSeq 2500)。数据经Fastp v 0.23.4质控，TopHat和Cufflink分析差异基因，以|log₂FoldChange|≥1和P≤0.05为标准筛选出差异表达基因。利用g:Profiler在线数据库对差异表达基因进行富集分析，利用实时荧光定量PCR对转录组测序(RNA-Seq)结果进行验证。【结果】与WT型巴马香猪相比，ZBED6-KO型巴马香猪的肺脏重量无显著变化(P＞0.05)。利用转录组测序在WT和ZBED6-KO型巴马香猪肺脏组织中共筛选出480个差异表达基因，其中上调基因125个，下调基因355个。上调基因主要富集在2条与免疫相关的通路，下调基因主要富集在代谢相关通路中。实时荧光定量PCR验证结果显示，上调和下调基因的表达变化趋势与RNA-Seq结果一致，证实了RNA-Seq数据的可靠性。【结论】ZBED6基因敲除影响了巴马香猪肺脏组织的基因表达谱，其中免疫相关基因普遍上调，而代谢相关基因显著下调。本研究结果为ZBED6在肺脏组织中的功能与作用提供更多的理论支持和证据，进一步填补了转录因子ZBED6在哺乳动物中肺脏方面作用机制的研究空白。

【目的】探究热休克蛋白GroEL对布鲁氏菌体外生长的影响及其在巨噬细胞定位情况，为研究GroEL基因的生物学功能奠定基础。【方法】采用同源重组及SacB反向筛选技术，以牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)A19株为研究对象，构建牛种布鲁氏菌A19株GroEL基因缺失株(A19ΔGroEL)和过表达株(A19-HA/GroEL)；绘制GroEL基因缺失菌株及过表达菌株的体外生长曲线，检测GroEL对布鲁氏菌体外生长的影响，采用间接免疫荧光试验检测GroEL在RAW264.7巨噬细胞中的定位，并通过免疫电镜观察GroEL在布鲁氏菌中定位。【结果】PCR结果显示，扩增出了大小为1 520 bp的特异性条带，表明GroEL基因缺失株A19ΔGroEL构建成功。Western blotting结果显示，获得了大小为60.2 ku的目的条带，表明过表达株A19-HA/GroEL构建成功。细菌生长曲线结果显示，牛种布鲁氏菌A19、A19ΔGroEL和A19-HA/GroEL的体外生长趋势无显著差异(P＞0.05)。间接免疫荧光试验结果显示，GroEL主要定位于RAW264.7巨噬细胞的胞质中。免疫电镜观察结果显示，GroEL主要定位于布鲁氏菌的外膜和内膜。【结论】本研究成功构建了布鲁氏菌GroEL基因缺失株和过表达株，揭示了GroEL基因的缺失不影响布鲁氏菌的体外生长，且GroEL主要定位于RAW264.7巨噬细胞的细胞质和布鲁氏菌的外膜和内膜，为深入探究GroEL的生物学功能提供了理论基础和数据支持。

【目的】2024年12月,山东省平度市某商品代白羽肉鸡养殖场28日龄肉鸡群出现跗关节肿大、瘫痪症状，陆续出现死亡，为确定引起该场鸡群发病的病因,本研究对送检的病死鸡进行剖检和实验室诊断。【方法】采集病鸡肝脏、脾脏组织、脏器外层纤维素性渗出物、关节腔分泌物、咽喉拭子,通过实时荧光定量PCR/RT-PCR方法对引发类似临床症状的传染病病原鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)、禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)、鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae，MS)核酸进行检测，确定发病原因。通过对关节腔分泌物进行细菌分离培养、革兰染色镜检观察、血清型鉴定、16S rRNA基因序列分析及药物敏感性试验确定病鸡感染细菌特性及药物敏感性情况；将组织样品接种LMH细胞扩繁，用PCR方法检测病毒性病原的主要结构蛋白基因并进行测序分析,确定病鸡感染病毒的分子流行病学情况。【结果】实时荧光定量PCR/RT-PCR检测显示，RA、ARV Ct值＜35，判定为阳性；MS无Ct值，判定为阴性。细菌学试验结果显示,分离菌株在血平板、TSA平板上呈半透明圆形突起、边缘整齐、表面光滑小菌落,该菌为单个和成对的革兰阴性短杆菌，疑似为RA。血清型鉴定结果显示，该分离菌株为RA血清10型。分离菌16S rRNA基因扩增测序结果经BLAST分析与鸭源RA参考菌株位于同一分支，相似性＞99%，鉴定分离菌为RA。药敏试验结果显示,该分离菌株对头孢曲松、头孢噻肟、多黏菌素B敏感,对新霉素、庆大霉素、卡那霉素、氨苄西林、阿莫西林、环丙沙星耐药。PCR检测细胞培养物显示，ARV σC基因核酸阳性,进一步对该基因片段分析发现，该毒株属于基因GC1-sub型，与经典疫苗株S1133、1733株不在同一分支。【结论】本研究通过综合诊断方法明确了该鸡场发病的病因为RA与ARV混合感染,RA分离株具有一定的耐药性，ARV分离株属于GC1-sub分支,本研究结果可为青岛地区商品肉鸡疫病科学防控提供参考。

【目的】研究小单元隔离栏舍对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)免疫及免疫退出的防控效果。【方法】试验设置常规封闭式栏舍免疫退出组(conventional closed pigsty immune-exit group，CCP-N)和PCV2免疫组(PCV2 immune group，CCP-PCV2)，小单元隔离栏舍免疫退出组(small-cell partition pigsty immune-exit group,SPP-N)、PCV2免疫组(PCV2 immune group，SPP-PCV2)和PRRSV免疫组(PRRSV immune group,SPP-PRRSV)，每组10个重复，每个重复1头猪，从断奶至出栏养殖200 d。2种栏舍的免疫退出组不进行任何疫苗免疫，PCV2免疫组和PRRSV免疫组分别于入栏后第20和30天进行1次疫苗免疫。试验第0、60、140、200天检测血液PRRSV N蛋白抗体和PCV2抗体水平，试验第200天检测血液PRRSV GP5蛋白抗体水平和组织PRRSV核酸水平，观察和统计试验猪肺部病变情况。【结果】在试验期内，SPP-N组猪血清PRRSV N蛋白的抗体水平全程处于低水平状态，显著低于其余各组(P＜0.05)；PRRSV阳性率全程为0，明显低于其余各组。试验结束时SPP-N组猪血清PRRSV GP5蛋白抗体水平极显著低于其余各组(P＜0.01)；PRRSV N蛋白抗体单阴性率及N蛋白和GP5蛋白抗体双阴性率均为100%，高于其余各组；猪肺脏组织病变得分值最低且极显著低于其余各组(P＜0.01)；组织PRRSV核酸阴性率及猪血清PRRSV N蛋白抗体、GP5蛋白抗体和组织PRRSV核酸三阴性率为100%，高于其余各组。试验第60天，所有试验组猪血清PCV2抗体水平和阳性率升至峰值并维持至试验结束。【结论】在存在PRRSV和PCV2混合感染的养殖场，小单元隔离栏舍PRRSV和PCV2免疫退出养殖效果显著，可有效阻断PRRSV的感染，明显提升猪肺脏健康度，起到PRRSV长期阴性养殖的效果，是一种良好的施行PRRSV和PCV2免疫退出养殖的支撑设备。

细菌感染是全球人和动物健康的重大挑战，致病菌携带有多种毒力基因，在感染过程中发挥各种独特的作用，从而实现在宿主的敌对环境中生存与繁殖。随着细菌耐药性的不断加剧，以及“超级细菌”的出现，使得细菌感染变得难以治疗，因此，利用有效的筛选方法发现新的细菌毒力基因，解析其致病机制，提供新的疫苗和药物靶点显得尤为迫切。笔者通过Sci-Hub、Science Driect、谷歌学术、Web of Science、PubMed、中国知网等文献检索网站，对细菌毒力基因相关文献进行了系统检索与分类整合。重点从基因突变、体内表达技术、组学、基因编辑及转座子技术等方面对筛选细菌毒力基因的方法及其应用进行了详尽阐述，以期为筛选细菌新的毒力基因提供思路和理论依据。

【目的】制备抗A群猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP7蛋白第208—222位氨基酸处(208—222aa)结构域单克隆抗体，并探究其免疫原性，为建立A群PoRV检测方法提供参考。【方法】利用AlphaFold3软件预测4种主要流行G基因型(G3、G4、G5和G9)PoRV VP7蛋白三聚体结构，对其208—222aa区域的特征性抗原表位进行比对和拟合。设计截短VP7蛋白，并分别与GST、MBP标签融合。通过原核表达系统分别表达重组蛋白GST-VP7和MBP-VP7，利用亲和层析纯化重组蛋白。利用纯化的MBP-VP7重组蛋白免疫小鼠，制备杂交瘤细胞株，采用人工合成208—222aa多肽进行筛选，获得特异性分泌抗体的细胞株。【结果】208—222aa区域结构分析显示，该结构域在不同基因型PoRV VP7蛋白中具有较高的构象保守性。通过原核表达系统，成功获得高纯度可溶性表达的重组蛋白GST-VP7和MBP-VP7。通过208—222aa多肽筛选，获得2株可分泌针对该结构域特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株：10F11G和5F6B。间接免疫荧光检测显示，10F11G和5F6B抗体可有效识别天然PoRV颗粒。【结论】本研究成功获得了2株可稳定分泌针对PoRV VP7蛋白208—222aa结构域特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。试验结果为A群PoRV相关抗体制备和检测方法开发提供了基础材料。

【目的】探究湖南地区肝片吸虫的单倍型多样性(Hd)、遗传分化及种群扩张情况，并阐明其种系发育关系。【方法】试验以采自湖南张家界、怀化、邵阳、娄底、永州及湘西6个地区的36株肝片吸虫为研究对象，通过PCR扩增其细胞色素C氧化酶Ⅰ亚基(cox1)、内转录间隔Ⅰ区(ITS-1)基因序列并测序。利用ClustalX、Dnasp 5.0和Network 4.6软件分析湖南6个地区肝片吸虫的单倍型多样性；运用Dnasp 5.0和Arlequin version 3.0软件探究肝片吸虫的遗传分化及种群扩张状况，并利用ClustalX、PhyML 3.0软件分析其种系发育关系。【结果】肝片吸虫cox1基因序列呈AT碱基偏好，存在36个碱基突变位点，含有22个单倍型(A1～A22，Hd＝0.9571)，其遗传分化系数(Fst)为0.013～0.278，基因流(Nm)为-1.895～18.981，Tajima’s D值为-0.996～0.564，Fu’s Fs值为-2.452～0.391。肝片吸虫ITS-1基因序列呈GC碱基偏好，存在17个碱基突变位点，含有8个单倍型(B1～B8，Hd＝0.7762)，其Fst为-0.174～0.564，Nm为-5.932～7.103，Tajima’s D值为-1.337～1.389，Fu’s Fs值为-1.072～2.139。此外，36株肝片吸虫在各种系发育树中均共同聚类成一个分支。【结论】本研究显示湖南部分地区的肝片吸虫之间存在一定水平的单倍型多样性，且出现了不同程度的遗传分化，均经历了多次种群扩张事件，但它们之间亲缘关系仍较近。

【目的】构建表达免疫原融合鸡DEC-205结合肽的重组神话猪联合乳杆菌(LigiLactobacillus saerimneri,L.sae)，探究其对鸡外周血树突状细胞(PB-MoDC)的影响。【方法】构建含组成型启动子HCE、增强子T7 g10、信号肽ssUSP及细胞壁锚定蛋白LPXTDG的乳酸菌表达质粒p612。插入Flag标签、鸡DEC-205短肽(DL(结合肽)/PS(对照肽))融合鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列，构建重组质粒p612-VP2-PS、p612-VP2-DL。重组质粒经双酶切鉴定后，电转入神话猪联合乳杆菌M11，构建重组乳杆菌p612-VP2-PS/M11、p612-VP2-DL/M11。利用Western blotting及免疫电镜鉴定蛋白表达和分布情况；通过荧光显微镜观察未成熟PB-MoDC细胞对重组乳杆菌的吞噬效果；重组菌作用PB-MoDC细胞4 h后，利用实时荧光定量PCR检测细胞表面标志物(MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD83、DEC-205)及炎性因子(IFN-γ、IL-1β、IL-12、IL-6、TNF-α、CXCLi1)的转录水平。【结果】试验成功获得了携带空载体p612、重组质粒p612-VP2-DL(表达VP2和结合肽)和p612-VP2-PS(表达VP2和对照肽)的神话猪联合乳杆菌M11。Western blotting结果显示，重组乳杆菌p612-VP2-PS/M11、p612-VP2-DL/M11菌体沉淀中均可检测到目的蛋白表达；免疫电镜观察显示，重组蛋白主要分布在胞质及细胞壁内壁；重组菌可被未成熟的PB-MoDC细胞吞噬。与p612-VP2-PS/M11组相比，p612-VP2-DL/M11组PB-MoDC细胞中的MHC-Ⅱ、CD80、CD40、CD83、IL-1β、IL-12、IFN-γ、CXCLi1基因转录水平显著或极显著上调(P＜0.05；P＜0.01)；两组间PB-MoDC细胞中DEC-205、IL-6、TNF-α基因转录水平无显著差异(P＞0.05)。【结论】本研究成功构建了表面表达免疫原融合鸡DEC-205结合肽的重组鸡肠道乳杆菌，其能有效刺激PB-MoDC细胞成熟。试验结果为研发畜禽疫苗的新型靶向递送策略提供了理论依据。

【目的】研究参姜止痢合剂(Shengjiang Zhili mixture, SJZL)在体内对小鼠免疫功能的调节作用，为其药理学研究和临床用药提供试验依据。【方法】将48只BALB/c小鼠随机分为参姜止痢合剂低(5 g/kg)、中(10 g/kg)、高(20 g/kg)剂量组和空白对照组，每组12只，各药物组小鼠每天灌胃给药1次，空白对照组小鼠灌服等量生理盐水，连续给药6 d。分别于给药3和6 d后，每组随机选择6只小鼠称重后处死，计算脾脏指数和胸腺指数；制备小鼠脾细胞悬液，采用CCK-8试剂盒检测小鼠淋巴细胞增殖率；制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液，采用中性红吞噬法检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力；小鼠眼球采血，采用ELISA试剂盒检测小鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)的含量。【结果】所有试验组小鼠精神状态、采食饮水、二便均表现正常。与空白对照组相比，各给药组小鼠体重、脾脏指数、胸腺指数均无显著差异(P＞0.05)；参姜止痢合剂高剂量组小鼠T细胞增殖率极显著升高(P＜0.01)，B细胞增殖率显著或极显著升高(P＜0.05；P＜0.01)；腹腔巨噬细胞吞噬率和代谢能力显著或极显著增加(P＜0.05；P＜0.01)；给药后6 d，高剂量组小鼠血清中IL-2、IL-6、IFN-γ含量均显著或极显著升高(P＜0.05；P＜0.01)。且随着给药时间增加，小鼠T和B细胞增殖率、巨噬细胞吞噬能力和代谢水平，以及IL-2、IL-6、IFN-γ含量均有所升高。【结论】本试验条件下，10和20 g/kg参姜止痢合剂可促进小鼠T细胞和B细胞增殖反应，增强小鼠巨噬细胞吞噬和代谢能力，提高小鼠血清中相关细胞因子的分泌量，从而提高小鼠的免疫力。

【目的】本研究旨在探讨列当提取物的抗氧化活性以及总苷、多糖成分对顺铂诱导的大鼠生殖系统氧化损伤的保护作用。【方法】本研究采用响应面法优化列当水提取工艺，通过体内外抗氧化试验测定水提物抗氧化活性，进一步从水提物中分离总苷和多糖，评价其对顺铂诱导的大鼠生殖系统损伤的保护作用。【结果】结合生产实际和提取成本，确定最佳提取条件为：提取时间90 min、提取温度100 ℃、料液比1∶30。体外抗氧化结果显示，列当水提物对2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和羟自由基均具有显著的清除能力，且随浓度提高抗氧化活性逐渐增强。体内试验结果显示，多糖低剂量组大鼠血清活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、蛋白质羰基(PCO)含量显著低于模型对照组(P＜0.05)；总苷低、中、高剂量组、多糖低剂量组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和总苷低、中剂量组、多糖中剂量组大鼠血清中还原性谷胱甘肽(GSH)含量均显著高于模型对照组(P＜0.05)；总苷和多糖低、中、高剂量均能显著抑制顺铂诱导的雌性大鼠血清促卵泡生成激素(FSH)升高，其中总苷低、中剂量和多糖低剂量效果最显著(P＜0.05)；总苷、多糖各剂量组能增加血清雌二醇(E₂)含量，总苷低剂量组大鼠血清睾酮(T)含量显著升高(P＜0.05)；总苷和多糖低剂量组可显著降低睾丸指数，且可显著抑制卵巢指数下降(P＜0.05)，保护卵巢卵泡形态，抑制颗粒细胞和卵泡液减少；总苷和多糖高剂量均显著降低附睾指数(P＜0.05)，改善精原细胞和精子数量，保护睾丸支持细胞形态。【结论】列当提取物通过其显著的抗氧化作用和激素调节机制，对顺铂诱导的大鼠生殖系统损伤具有显著的保护作用。本研究为列当提取物在临床中的应用提供了重要的试验依据和理论参考。

【目的】了解临床分离的大肠杆菌的耐药性和毒力，为后续禽大肠杆菌病的临床防治提供参考。【方法】本研究通过菌体形态学观察和分子生物学手段对临床分离的1株鸡源病原菌进行分离纯化鉴定，通过药敏试验了解分离菌株的耐药性，利用Illumina NovaSeq 测序平台对分离菌株进行全基因组测序。【结果】分离菌株在麦康凯琼脂培养基上呈现粉红色圆形、光滑的菌落，镜检为革兰阴性杆菌，16S rDNA测序结果显示，与GenBank数据库已登录的大肠杆菌(登录号：NR_024570.1)相似性＞98%，经mcr-1基因特异性引物PCR扩增发现，分离的大肠杆菌携带多黏菌素耐药基因mcr-1。药敏试验结果显示，该分离菌株对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、多肽类等12类抗菌药耐药，仅对氯霉素和米诺环素敏感，表现为多重耐药；分离菌株基因组总长为5 057 884 bp；基于KEGG、COG、GO、CAZy等数据库的基因功能注释分析表明，该菌株具备完整的氨基酸转运系统、细胞增殖与分化机制以及代谢功能；通过与CARD和VFDB数据库比对发现，该菌株具有效应器分泌系统、鞭毛、脑内皮侵袭素等毒力基因，且该菌株携带氨基糖苷类、磺胺类、喹诺酮类、肽类、四环素类和β-内酰胺类等多种抗菌药物的耐药基因，这些基因使该菌株表现出较强的毒力与多重耐药性。【结论】本研究分离获得1株鸡源携带mcr-1基因的大肠杆菌，具有多重耐药性与高毒力特征，其基因组结构与环境适应能力共同促成了其强致病性。本研究结果为禽大肠杆菌病的预防和治疗提供了一定的数据参考。

【目的】乳酸菌是对人体、动物和植物有益的一类菌群，在食品工业、医药健康及农业领域中广泛应用，野生动物因其生存环境与畜禽和人类存在较大差异，其肠道内菌群也存在明显多样性。本试验旨在从野生动物粪便中分离乳酸菌，并分析其生物学特性及抑菌活性，以期获得微生物制剂的候选株。【方法】收集江苏某野生动物园内不同动物的570份粪便样本，用MRS选择培养基进行初筛，通过菌落形态观察、革兰染色镜检、生化鉴定等进一步进行乳酸菌鉴定，从中筛选出不溶血的分离株，用16S rRNA基因序列比对确定其种属，对分离株进行耐酸、耐胆盐、抑菌活性、药敏试验、自凝性和疏水性、动物安全性等一系列体外试验。【结果】从样本中分离得到40株疑似乳酸菌，其中3株有溶血现象，其余37株经16S rRNA基因鉴定后发现其可分属于包括融合魏斯氏菌、罗伊氏乳杆菌、唾液联合乳杆菌等在内的11个种属。经多项体外试验筛选后发现，分离株发酵乳杆菌ZX2性能突出，与其他分离株相比高度耐酸，可以直接在pH 3.0的MRS培养基中生长，且可耐受0.3%胆盐；对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有一定的体外抑菌能力，对D型产气荚膜梭菌G07和超级耐药大肠杆菌DJ2无抑菌能力；自凝性在5 h内可达16%，疏水性可达95%以上；对氯霉素、四环素、青霉素、氨苄西林、头孢唑林、氧氟沙星均存在一定敏感性；对小鼠无致病性。【结论】本研究在野生动物粪便中分离出37株乳酸菌，其中发酵乳杆菌ZX2具有良好的益生特性，肠道定植能力优良，可作为潜力益生菌菌株应用于开发微生态制剂。

【目的】查明湖北省荆州市某养猪企业猪呼吸道疾病暴发病因，对病原进行生物学特性分析，为猪群疾病防治提供理论依据。【方法】采用PCR法对病料进行猪呼吸道疾病常见病原筛查，如猪链球菌、多杀性巴氏杆菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等；对患病猪的鼻咽拭子进行细菌分离，通过形态学特征鉴定、16S rRNA基因系统进化分析和多位点序列分析(MLST)对分离菌株进行血清型和分子分型鉴定；通过毒力基因检测、小鼠人工感染试验、生物被膜形成能力测定、耐药基因检测、抗菌药物和中药敏感性试验分析分离菌株的致病性和耐药性。【结果】病原筛查结果显示，患病猪的猪链球菌为阳性，其他病原如多杀性巴氏杆菌、PRRSV等均为阴性；从病猪鼻咽拭子成功分离到1株优势菌，形态学鉴定为革兰阳性链状球菌，16S rRNA基因系统进化分析发现，分离菌株与猪链球菌汇为一支，鉴定其为猪链球菌，命名为JZXW0103；经血清型鉴定和MLST分析确定分离菌株JZXW0103为ST25型猪链球菌血清2型；分离菌株携带毒力基因mrp、sly、orf2、gapdh和sao，具有β-溶血活性，感染小鼠可致肝脏、肺脏和脑等器官出现出血及炎症；分离菌株JZXW0103具有弱生物被膜形成能力，携带有bla_TEM、aadA1和aadA2等9种耐药基因，对氨苄西林、头孢他啶和苯唑西林等10种抗菌药物具有耐药性，对青霉素、头孢噻肟和头孢哌酮等11种抗菌药物及中药全蝎敏感。【结论】本研究分离到1株ST25型猪链球菌血清2型，其具有一定致病性和多重耐药性，研究结果为猪链球菌感染的防控提供参考依据。

【目的】本研究基于网络药理学和分子对接技术，探讨了果胶及其代谢产物短链脂肪酸调控山羊子宫内膜异位症的作用靶点及通路调控机制。【方法】通过中药系统药理学数据库(TCMSP)、PharmMapper、SwissTargetPrediction和SEA数据库预测果胶及其代谢产物短链脂肪酸的潜在作用靶点，并结合GeneCard、DisGeNET、TTD、DrugBank及OMIM等数据库获取山羊子宫内膜异位症相关潜在靶点。利用Venny 2.1工具筛选出果胶及其代谢产物短链脂肪酸与山羊子宫内膜异位症的交集靶点，构建蛋白互作(PPI)网络并识别核心靶点；通过DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析。进一步利用Autodock Tools 1.5.7软件对果胶及其代谢产物短链脂肪酸与核心作用靶点进行分子对接模拟，验证其结合能力。【结果】共筛选出501个果胶靶点、490个短链脂肪酸靶点及3 641个疾病靶点，其交集靶点为26个。PPI网络分析结果显示，雄激素受体(AR)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、信号传导及转录激活蛋白 3(STAT3)、表皮生长因子受体(EGFR)、热休克蛋白90AA1(HSP90AA1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、成纤维细胞生长因子2(FGF2)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)为药物作用于疾病的核心靶点。GO功能富集分析显示，生物过程富集10个条目，细胞组分富集1个条目，分子功能富集3个条目。KEGG通路富集分析表明，果胶及其代谢产物主要通过调控EGFR酪氨酸激酶抑制剂、PI3K-Akt信号通路、PPAR信号通路和孕酮介导的卵母细胞成熟等关键通路，从而调控山羊子宫内膜异位症。分子对接结果显示，果胶及其代谢产物短链脂肪酸与核心靶点(AR和PPARγ)的结合能均＜－20 kJ/mol。【结论】本研究预测结果显示，果胶及其代谢产物短链脂肪酸通过作用于AR、CDK1、STAT3、EGFR、HSP90AA1、PPARγ、FGF2和PPARα等核心靶点，调控EGFR酪氨酸激酶抑制剂、PI3K-Akt等关键信号通路，抑制细胞增殖、促进凋亡，从而缓解山羊子宫内膜异位症。本研究结果为果胶作为膳食纤维在山羊繁殖中的应用提供了重要的理论依据。

【目的】对苏山猪甘露糖苷酶α2A类成员1(mannosidase alpha class 2A member 1,MAN2A1)基因进行克隆和生物信息学分析，并揭示MAN2A1基因过表达对猪流感病毒(Swine influenza virus，SIV)复制的调控作用。【方法】本研究以苏山猪肺脏cDNA为模板扩增MAN2A1基因编码区序列(CDS)，并将目的片段通过T4 DNA连接酶克隆到pMD19-T载体上。将序列与其他物种及不同品种猪进行相似性比对并构建系统发育树；利用生物信息学软件对苏山猪MAN2A1蛋白序列特征进行分析；使用实时荧光定量PCR检测MAN2A1基因在苏山猪中的组织表达谱及MAN2A1基因过表达前后SIV M和NP基因的表达水平；使用AutoDock软件对MAN2A1蛋白与SIV M和NP蛋白进行分子对接预测。【结果】本研究成功克隆了苏山猪MAN2A1基因CDS区序列，其长度为3 435 bp。与NCBI数据库公开的猪的MAN2A1基因序列(XM_003123823.6)相比，苏山猪MAN2A1基因CDS区存在6个单核苷酸多态位点(single nucleotide polymorphism sites,SNPs)，包含2个错义突变和4个同义突变。不同物种MAN2A1基因系统进化树显示，猪MAN2A1基因与牛和羊亲缘关系最近，与灵长类关系次之，与家禽和斑马鱼亲缘关系最远；不同品种猪MAN2A1基因系统进化树显示,苏山猪MAN2A1基因与中国五指山猪亲缘关系最近，与杜洛克亲缘关系最远。生物信息学分析结果显示，苏山猪MAN2A1蛋白含1 144个氨基酸，分子质量为131.42 ku，理论等电点为7.85；二级结构中α-螺旋、β-折叠、无规则卷曲占比分别为33.65%、15.73%和50.61%；三级结构全局模型质量评估GMQE评分为0.9，质量较好；苏山猪MAN2A1蛋白含有3个结构域(第168－498、289-503和649－1 140位氨基酸)，主要定位在细胞质内的高尔基体中，可能与MAN1A1、FUT8和COPB2等蛋白存在相互作用。组织表达谱检测结果表明，苏山猪MAN2A1基因在肝脏和脾脏中的表达水平显著高于其他组织(P＜0.05)，在心脏和肌肉中的表达水平显著低于其他组织(P＜0.05)。本研究成功构建了MAN2A1基因的过表达载体，与对照组相比，过表达组3D4/21细胞中MAN2A1基因水平显著上调(P＜0.05)；感染H1N1亚型SIV时，过表达MAN2A1基因导致病毒M和NP基因表达水平显著上调(P＜0.05)。分子对接预测结果显示，MAN2A1蛋白与H1N1亚型SIV NP、M1和M2蛋白均可能存在相互作用关系(iptm＋ptm＞0.9)，表明MAN2A1蛋白可能直接作用于NP和M蛋白进而调控H1N1亚型SIV的复制。【结论】本研究成功克隆了苏山猪MAN2A1基因CDS区序列，并发现苏山猪MAN2A1基因过表达促进了H1N1亚型SIV在3D4/21细胞中的复制，上述研究结果为进一步研究MAN2A1基因的功能和分子机制提供了理论依据。

【目的】明确1例野生死亡朱鹮的主要病原菌,并对其进行耐药性、致病性及生物学特性分析，为相关疾病的防治提供参考。【方法】无菌采集湖南崀山自然保护区内死亡朱鹮的肝脏、小肠及胸腔积液样本进行细菌分离培养。通过菌落形态观察、革兰染色及全自动微生物质谱系统进行菌株鉴定；利用定量悬浮法评估不同消毒剂对分离菌的消杀效果；采用微量肉汤稀释法检测分离菌的药物敏感性；通过全基因组测序分析分离菌耐药基因、毒力因子及多位点序列分型(MLST)情况；利用Parsnp软件构建系统发育树，并通过动物试验检测菌株致病力。【结果】试验从死亡朱鹮小肠中分离得到4株细菌。分离菌在血平板上呈乳白色菌落，在LB固体培养基上为半透明、表面有光泽的菌落,革兰染色镜检结果为革兰阴性短杆菌。全自动微生物质谱检测系统鉴定显示，4株菌均为弗氏柠檬酸杆菌，分别命名为ZhLB2、ZhX1、ZhX4和ZhX5。消毒剂消杀试验结果显示，10种受试消毒剂在推荐浓度下对分离菌均具有良好杀菌效果，其中月苄三甲氯铵和浓戊二醛溶液效果最佳。药敏试验结果显示，4株分离菌对复方新诺明、多黏菌素B、头孢西丁及美罗培南均完全耐药(4/4)，对氨苄西林、恩诺沙星和氟苯尼考高度耐药(3/4)；4株分离菌对头孢噻呋和庆大霉素均表现敏感，但仅分离株ZhLB2对四环素表现敏感。全基因组测序分析结果显示，4株分离株共携带bla_CMY、qnrB等16种耐药基因及44种毒力因子；MLST分型显示，分离株ZhX1、ZhX4属于ST580型，ZhLB2、ZhX5为未知分型。系统发育树结果显示，分离株ZhLB2和ZhX5分别与孟加拉国鸡源和斯里兰卡水源弗氏柠檬酸杆菌处于同一分支，ZhX1、ZhX4均与中国水源弗氏柠檬酸杆菌处于同一分支。1×10⁹ CFU/mL菌液感染小鼠，分离株ZhX1、ZhLB2、ZhX4、ZhX5的致死率分别为70%、40%、20%和10%，病理学检查可见特征性肺部出血和小肠炎症。【结论】本研究从朱鹮小肠中分离获得4株弗氏柠檬酸杆菌，其具有多重耐药性，对小鼠具有致病性。本研究结果为珍稀鸟类疾病防控体系的完善提供了重要理论基础，同时为指导临床合理用药提供了参考。

【目的】以非洲绿猴胚胎肾细胞(Marc-145)为模式细胞，研究白术多糖(Atractylodes macrocephala polysaccharides，AP)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)感染Marc-145细胞所致损伤的保护作用及其机制。【方法】取生长至80%～90%融合度的Marc-145细胞用不同稀释度(10^-1至10^-10)的PRRSV感染，设空白对照组，继续培养后逐日记录各稀释度下产生细胞病变效应(CPE)孔数，待病变稳定后按Reed-Muench法计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)。将Marc-145细胞以每孔不低于1×10⁶/mL的密度接种于96孔细胞培养板中，用100 TICD₅₀的PRRSV分别感染细胞0、12、24、48及96 h，于各时间点用显微镜随机拍照，观察细胞形态。将Marc-145细胞分为对照组和不同浓度AP组(200、400、800、1 600、3 200 和6 400 μg/mL),通过细胞毒性试验检测AP最适浓度范围；将Marc-145细胞分为对照组(Mock)、模型组(PRRSV)和给药组(不同浓度AP组(200、400、800 μg/mL)及1 μmol/mL利巴韦林组)，采用以下3种给药方式评估AP对PRRSV感染的影响：①感染前给药：分别用AP和利巴韦林孵育给药组细胞24 h后，给药组和模型组同时感染PRRSV 24 h；②感染同时给药：给药组分别用AP、利巴韦林与PRRSV孵育细胞24 h，模型组同时单独感染PRRSV 24 h；③感染后给药：给药组和模型组细胞同时感染PRRSV 24 h后，给药组分别给予AP和利巴韦林孵育24 h，模型组同时给予2% FBS DMEM孵育24 h，以上各处理组中，对照组均以2% FBS DMEM孵育细胞24 h作为对照，待处理结束后，各组细胞均换用2% FBS DMEM再培养48 h后检测。以上试验感染滴度为100 TCID₅₀，利用半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)法检测AP对于PRRSV感染不同阶段滴度的影响，实时荧光定量PCR检测AP对于PRRSV感染不同阶段PRRSV ORF7基因相对表达量，利用比色法检测AP对于PRRSV感染不同阶段细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量的影响，Western blotting法检测PRRSV感染细胞不同阶段N蛋白和Nrf2/HO-1通路蛋白的表达。【结果】由PRRSV感染后24 h的CPE孔数，按照Reed-Muench法计算PRRSV的滴度为10^-6.6 TCID₅₀/mL。与感染后0 h相比，PRRSV感染后24 h细胞出现聚集、团缩的现象，故该毒株最适感染细胞时间为24 h。AP孵育Marc-145细胞24 h时，与对照组相比，200～800 μg/mL AP组细胞活力显著提高(P＜0.05)，后续选用200～800 μg/mL AP 孵育细胞24 h作为试验最适条件。与模型组相比，AP能显著降低PRRSV内吞、吸附阶段中的病毒TCID₅₀值、PRRSV ORF7基因相对表达量、MDA含量和PRRSV N蛋白表达量(P＜0.05)，显著提高细胞SOD活力和GSH含量(P＜0.05)并激活Nrf2/HO-1通路蛋白(P＜0.05)，但对于病毒胞内复制阶段中的上述指标无显著影响(P＞0.05)。【结论】本试验结果表明，200～800 μg/mL AP可通过激活Nrf2/HO-1通路抵抗PRRSV内吞、吸附阶段中对于细胞的氧化应激损伤作用。

【目的】调查山东地区产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的流行、耐药、致病性等情况，并探究牛至油、肉桂醛、桉叶油、月桂酸甘油酯、大蒜油5种植物精油对该菌的抑制作用。【方法】从山东地区不同商品肉鸡规模化养殖场采集100份肉鸡肠道样品进行细菌分离，利用生化试验、16S rRNA测序和PCR扩增毒素基因对分离菌株进行鉴定，并对鉴定为产气荚膜梭菌的菌株进行药物敏感性检测和致病试验；利用微量肉汤稀释法检测5种植物精油对产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度(MIC)，选用抑菌效果较好的植物精油，利用棋盘法进行两两复配，检测复配后植物精油对产气荚膜梭菌的分级抑菌浓度(FIC)指数。【结果】分离菌在TSC平板上呈现中间黑色、周围有白色浑浊圈的圆形菌落，革兰染色镜检呈革兰阳性，100份样品中共分离获得32株分离菌。生化鉴定结果显示，分离菌对葡糖糖、乳糖、麦芽糖等呈阳性，对甘露醇、吲哚呈阴性。16S rRNA基因PCR扩增、测序比对结果显示，分离菌株与产气荚膜梭菌相似性＞99%。毒素基因多重PCR鉴定结果显示，仅扩增出202 bp的目的条带，鉴定分离菌株均为A型产气荚膜梭菌，分离率为32%。药敏试验结果显示，分离菌株对红霉素、诺氟沙星、环丙沙星耐药率较高。致病性试验显示，5株不同地区来源的分离菌均能引起肉鸡严重坏死性肠炎。体外抑菌结果显示，大蒜油、肉桂醛、月桂酸甘油酯对产气荚膜梭菌的MIC分别为250、125和125 μg/mL，复配组合大蒜油＋肉桂醛、大蒜油＋月桂酸甘油酯、肉桂醛＋月桂酸甘油酯的FIC分别为1、2和2.5。【结论】山东地区肉鸡源产气荚膜梭菌分离率较高且A型菌株占绝对优势，分离菌株耐药性和致病性较强。大蒜油、肉桂醛、月桂酸甘油酯对产气荚膜梭菌的抑菌效果较好，且大蒜油与肉桂醛联合表现相加作用。

【目的】评估盐酸多巴胺对白羽肉鸡胃肠动力的影响，并进一步确定盐酸多巴胺诱导肉鸡胃肠动力障碍模型的适宜剂量。【方法】试验选取36只1日龄健康白羽肉鸡，随机分为对照组及盐酸多巴胺低、中、高剂量组，每组设3个生物学重复，各组肉鸡前期不作任何处理。14日龄时，盐酸多巴胺各剂量组肉鸡通过腹腔注射相应剂量盐酸多巴胺(3.979、7.958、15.916 mg/kg BW)建立胃肠动力障碍模型。试验结束后采集肉鸡胃肠组织，测定胃排空率和小肠推进率，检测胃肠消化酶活性、胃肠激素含量及肠道黏膜形态。【结果】与对照组相比，盐酸多巴胺各剂量组肉鸡的胃排空率及肠推进率均显著降低(P＜0.05)，且呈剂量依赖性；各组肉鸡肠道黏膜形态均无明显差异。消化酶活性测定结果显示，盐酸多巴胺中、高剂量组肉鸡不同肠段中胰淀粉酶、胰蛋白酶和胰脂肪酶活性均显著低于对照组(P＜0.05)。胃肠激素含量测定显示，与对照组相比，盐酸多巴胺各剂量组肉鸡十二指肠和血清中P物质、胃动素含量及肌胃多巴胺含量均显著降低(P＜0.05)，中、高剂量组肉鸡肌胃5-羟色胺含量显著降低(P＜0.05)；盐酸多巴胺各剂量组肉鸡血清及十二指肠中P物质、胃动素和肌胃多巴胺含量均随剂量增加而降低，各组间差异显著(P＜0.05)。【结论】盐酸多巴胺对白羽肉鸡胃肠动力存在显著影响，且呈剂量依赖性。本试验条件下，盐酸多巴胺诱导的肉鸡胃肠动力障碍模型最佳剂量为7.958 mg/kg BW。