云南地区血清7型猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及生物学特性分析

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2026.01.045

摘要/Abstract

摘要：

目的研究云南地区猪源胸膜肺炎放线杆菌的生物学特性。方法从云南红河州某猪场患呼吸道疾病猪肺脏中分离细菌，采用生化试验、16S rDNA序列分析和PCR扩增鉴定分离菌，并分析分离菌的血清型、致病性、药物敏感性和耐药基因等生物学特性。结果从病猪肺脏样品中分离到1株革兰阴性小球杆菌，将其编号为YN240724。生化鉴定结果显示，分离菌分解葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖和甘露醇产酸，氧化酶、尿素酶及硝酸盐还原试验呈阳性，其生化特性与胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）参考株相同。16S rDNA基因序列分析结果显示，分离菌与胸膜肺炎放线杆菌模式菌株ATCC 27088^T和其他胸膜肺炎放线杆菌参考株间的16S rDNA序列相似性分别为100%和99.6%~100%；分离菌株与全部胸膜肺炎放线杆菌参考株形成同一个进化分支；基于上述特征分离菌YN24074被鉴定为胸膜肺炎放线杆菌。血清型鉴定结果显示，该分离菌为胸膜肺炎放线杆菌血清7型。耐药基因检测结果显示，分离菌携带β-内酰胺内耐药基因bla_CIT和bla_TEM以及四环素类耐药基因tetM。药敏试验结果显示，分离菌对氨基糖苷类（庆大霉素和阿米卡星）、喹诺酮类（氧氟沙星）、酰胺醇类（氟苯尼考）、四环素类（四环素）、磺胺类（磺胺甲噁唑）以及头孢类（头孢噻肟和头孢呋辛）敏感，对青霉素类（青霉素、氨苄西林和哌拉西林）以及糖肽类（万古霉素）耐药。致病性试验结果显示，分离菌对小鼠的半数致死量（LD₅₀）为7.5×10⁴CFU，致病性较强。结论本研究从云南地区分离获得1株猪源血清7型胸膜肺炎放线杆菌，其携带耐药基因bla_CIT、bla_TEM及tetM，对多种抗菌药物表现耐药，致病性较强。试验结果可为云南地区猪场猪传染性胸膜肺炎的治疗和免疫防控提供重要参考。

关键词: 猪; 胸膜肺炎放线杆菌; 分离鉴定; 血清型; 致病性

Abstract:

Objective This experiment aimed to study the biological characteristics of Actinobacillus pleuropneumoniae from pigs in Yunnan. Method The bacteria was isolated from the lung of pigs suffering from respiratory diseases in a pig farm located at Honghe， Yunnan. The bacterial isolate was identified through biochemical tests， 16S rDNA sequence analysis and PCR amplification. The biological characteristics of the isolate， including serotypes， pathogenicity， drug sensitivity and resistance genes， were analyzed. Result A Gram-negative coccobacillus was isolated from the lung samples of the diseased pig and was numbered YN240724. The biochemical identification results showed that the isolate decomposed glucose， fructose， sucrose， xylose and mannitol to produce acid， and the oxidase， urease and nitrate reduction tests were positive. These biochemical characteristics were the same as those of the reference strain of Actinobacillus pleuropneumoniae. The results of the 16S rDNA gene sequence analysis showed that the 16S rDNA sequence similarity between the isolate and the type strain ATCC 27088^T of Actinobacillus pleuropneumoniae and other reference strains of Actinobacilluspleuropneumoniae was 100% and 99.6%-100%， respectively. The isolate formed the same evolutionary branch with all the reference strains of Actinobacillus pleuropneumoniae. Based on these characteristics， the isolate YN24074 was identified as Actinobacillus pleuropneumoniae. The serotype identification results showed that the isolate was Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 7. The results of the drug resistance gene detection showed that the isolate carried the β-lactam resistance genes bla_CIT and bla_TEM， as well as the tetracycline resistance gene tetM. The results of the antimicrobial susceptibility test showed that the isolate was sensitive to aminoglycosides （gentamicin and amikacin）， quinolones （ofloxacin）， chloramphenicols （florfenicol）， tetracyclines （tetracycline）， sulfonamides （sulfamethoxazole）， and cephalosporins （cefotaxime and cefuroxime）， but resistant to penicillins （penicillin， ampicillin and piperacillin） and glycopeptides （vancomycin）. The pathogenicity test results showed that the median lethal dose （LD₅₀） of the isolate for mice was 7.5×10⁴ CFU， indicating a relatively strong pathogenicity. Conclusion In this study， a strain of porcine Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 7 from Yunnan was isolated. This strain carried the resistance genes bla_CIT， bla_TEM and tetM， and showed resistance to various antibacterial agents， with strong pathogenicity. This test results could provide important references for the treatment and immunization prevention and control of porcine contagious pleuropneumonia in pig farms of Yunnan.

Key words: pigs; Actinobacillus pleuropneumoniae; isolation and identification; serotype; pathogenicity

中图分类号:

S855.1

李富祥, 宋建领, 李占鸿. 云南地区血清7型猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及生物学特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2026, 53(1): 499-508.

LI Fuxiang, SONG Jianling, LI Zhanhong. Isolation， Identification and Biological Characterization of Actinobacillus pleuropneumoniae Serotype 7 from Pigs in Yunnan[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2026, 53(1): 499-508.

图/表 9

表1

图1

表2

图2

图3

图4

图5

表3

表4

参考文献 29

[1]	POHL S， BERTSCHINGER H U， FREDERIKSEN W， et al. Transfer of Haemophilus pleuropneumoniae and the Pasteurella haemolytica-like organism causing porcine necrotic pleuropneumonia to the genus Actinobacillus （Actinobacillus pleuropneumoniae comb. nov.） on the basis of phenotypic and deoxyribonucleic acid relatedness［J］. International Journal of Systematic Bacteriology， 1983， 33（3）：510-514.
[2]	STRINGER O W， BOSSÉ J T， LACOUTURE S， et al. Proposal of Actinobacillus pleuropneumoniae serovar 19， and reformulation of previous multiplex PCRs for capsule-specific typing of all known serovars［J］. Veterinary Microbiology， 2021， 255：109021.
[3]	SÁRKÖZI R， MAKRAI L， FODOR L. Isolation of biotype 1 serotype 12 and detection of Actinobacillus pleuropneumoniae from wild boars［J］. Pathogens， 2022， 11（5）： 505.
[4]	LOSINGER W C. Economic impacts of reduced pork production associated with the diagnosis of Actinobacillus pleuropneumoniae on grower/finisher swine operations in the United States［J］. Preventive Veterinary Medicine， 2005， 68（2-4）： 181-193.
[5]	PÉREZ MÁRQUEZ V M， OCHOA J L， CRUZ C V， et al. Isolation of Actinobacillus pleuropneumoniae from layer hens showing clinical signs of infectious coryza［J］. Avian Diseases， 2014， 58（4）： 638-641.
[6]	ZIMMERMAN J J， KARRIKER L A， RAMIREZ A，et al. Diseases of Swine［M］. 11th ed. Hoboken： Wiley-Blackwell， 2019.
[7]	SÁRKÖZI R， MAKRAI L， FODOR L. Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes in Hungary［J］. Acta Veterinaria Hungarica， 2018， 66（3）： 343-349.
[8]	PLASENCIA-MUÑOZ B， AVELAR-GONZÁLEZ F J， DE LA GARZA M， et al. Actinobacillus pleuropneumoniae interaction with swine endothelial cells［J］. Frontiers in Veterinary Science， 2020， 7： 569370.
[9]	GUARNERI F， ROMEO C， SCALI F， et al. Serotype diversity and antimicrobial susceptibility profiles of Actinobacillus pleuropneumoniae isolated in Italian pig farms from 2015 to 2022［J］. Veterinary Research， 2024， 55（1）： 48.
[10]	LI F， ZONG X， CHEN G， et al. Isolation， antimicrobial susceptibility， and genotypes of three Pasteurellaeae species prevalent on pig farms in China between 2021 and 2023［J］. Microorganisms， 2025， 13（4）： 938.
[11]	杨圆，于慧，何乐，等. 福建省某规模化猪场胸膜肺炎放线杆菌血清1型的分离鉴定［J］. 中国畜牧兽医，2024， 51（12）： 5449-5458.
	YANG Y， YU H， HE L， et al. Isolation and identification of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1 from a swine farm in Fujian province［J］. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine， 2024， 51（12）： 5449-5458. （in Chinese）
[12]	李凯明，董发明，刘守川，等. 洛阳某猪场猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定［J］. 中国畜牧兽医， 2020， 47（4）： 1241-1249.
	LI K M， DONG F M， LIU S C， et al. Isolation and identification of porcine contagious Actinobacillus pleuropneumoniae in Luoyang［J］. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine， 2020， 47（4）： 1241-1249. （in Chinese）
[13]	马爽，于国营，郭莉莉，等. 我国局部猪胸膜肺炎流行调查和血清型分析［J］. 中国畜禽种业， 2016， 12（4）： 125-127.
	MA S， YU G Y， GUO L L， et al. Epidemiological investigation of porcine contagious pleuropneumonia and serotype analysis of Actinobacillus pleuropneumoniae in China［J］. The Chinese Livestock and Poultry Breeding， 2016， 12（4）： 125-127. （in Chinese）
[14]	徐民生，柯海意，施科达，等. 广东省猪传染性胸膜肺炎放线杆菌分离鉴定及耐药表型和耐药基因检测与分析［J］. 中国畜牧兽医， 2022， 49（8）： 3212-3225.
	XU M S， KE H Y， SHI K D， et al. Isolation and identification of Actinobacillus pleuropneumoniae from Guangdong province and detection and analysis of drug resistance phenotype and gene［J］. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine， 2022， 49（8）： 3212-3225. （in Chinese）
[15]	POLZ M F， CAVANAUGH C M. Bias in template-to-product ratios in multitemplate PCR［J］. Applied Environmental Microbiology， 1998， 64（10）： 3724-3730.
[16]	李树清，易建平，陈志飞，等. 复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌方法的建立及初步应用［J］. 微生物学报， 2005，6： 150-153.
	LI S Q， YI J P， CHEN Z F， et al. Development and application of multiplex-PCR for identification of Actinobacillus pleuropneumoniae ［J］. Acta Microbiologica Sinica， 2005， 6： 150-153. （in Chinese）
[17]	BOSSÉ J T， LI Y， ANGEN Ø， et al. Multiplex PCR assay for unequivocal differentiation of Actinobacillus pleuropneumoniae serovars 1 to 3， 5 to 8， 10， and 12［J］. Journal of Clinical Microbiology， 2014， 52（7）： 2380-2385.
[18]	BOSSÉ J T， LI Y， FERNANDEZ CRESPO R， et al. Comparative sequence analysis of the capsular polysaccharide loci of Actinobacillus pleuropneumoniae serovars 1-18， and development of two multiplex PCRs for comprehensive capsule typing［J］. Veterinary Microbiology， 2018， 220： 83-89.
[19]	李富祥，王慧辉，赵文华，等. 云南省畜禽细菌耐药基因分布特征［J］. 中国兽医学报， 2021， 41（12）： 2454-2460.
	LI F X， WANG H H， ZHAO W H， et al. Distribution characteristics of antibiotic resistance genes in bacteria from livestock and poultry in Yunnan province［J］. Chinese Journal of Veterinary Science， 2021， 41（12）： 2454-2460. （in Chinese）
[20]	CLSI. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. 29th ed. CLSI supplement M100 ［S］. Wayne， PA： Clinical and Laboratory Standards Institute， 2019.
[21]	孙瑞元. 简捷实用的半数致死量综合计算法［J］. 药学学报， 1963， 2： 65-74.
	SUN R Y. A practical combined method for computing the median lethal dose （LD₅₀）［J］. Acta Pharmaceutica Sinica， 1963， 2： 65-74. （in Chinese）
[22]	王丹丹，陈国强，张常印，等. 猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株的分离鉴定及耐药性研究［J］. 中国畜牧兽医， 2019， 46（10）： 3124-3130.
	WANG D D， CHEN G Q， ZHANG C Y， et al. Isolation， identification and drug sensitive test of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 8［J］. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine， 2019， 46（10）： 3124-3130. （in Chinese）
[23]	CHUN J， OREN A， VENTOSA A， et al. Proposed minimal standards for the use of genome data for the taxonomy of prokaryotes［J］. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology， 2018， 68：461-466.
[24]	FUSSING V， PASTER B J， DEWHIRST F E， et al. Differentiation of Actinobacillus pleuropneumoniae strains by sequence analysis of 16S rDNA and ribosomal intergenic regions， and development of a species specific oligonucleotide for in situ detection［J］. Systematic and Applied Microbiology， 1998， 21（3）： 408-418.
[25]	王佳凡，郑博文，杨超，等. 四川猪传染性胸膜肺炎放线杆菌耐药基因流行规律与表型相关性研究［J］.云南农业大学学报（自然科学）， 2021，36（4）： 631-639.
	WANG J F， ZHENG B W， YANG C， et al. Study on the epidemiology regularity and phenotype correlation of drug-resistant genes of infectious Actinobacillus pleuropneumoniae in Sichuan［J］. Journal of Yunnan Agricultural University （Natural Science）， 2021， 36（4）： 631-639. （in Chinese）
[26]	陈旺. 新疆部分地区猪常见呼吸道细菌性疾病病原的检测［D］.乌鲁木齐：新疆农业大学， 2023.
	CHEN W. Detection of pathogens of common respiratory tract bacterial diseases in pigs in some areas of Xinjiang［D］. Urumqi： Xinjiang Agricultural University， 2023. （in Chinese）
[27]	吕佩帅，张丽红，丁小松，等. 胸膜肺炎放线杆菌在不同培养基中生长、生物膜形成及Apx毒素分泌能力的差异研究［J］. 动物医学进展， 2022， 43（1）： 6-11.
	LYU P F， ZHANG L H， DING X S， et al. Diversity on growth， biofilm formation and Apx toxin secretion of Actinobacillus pleuropneumoniae in different culture media［J］. Progress in Veterinary Medicine， 2022， 43（1）： 6-11. （in Chinese）
[28]	刘赵何. 某规模化猪场猪接触传染性胸膜肺炎的综合防治［D］.合肥：安徽农业大学， 2016.
	LIU Z H. Integrated control of porcine contagious pleuropneumonia in certain large-scale swine farm［D］. Hefei： Anhui Agricultural University， 2016.（in Chinese）
[29]	陈虹宇，朋璐，张娇，等. 猪胸膜肺炎放线杆菌临床分离株特性分析及疫苗候选菌株筛选［J］. 四川农业大学学报， 2025， 43（2）： 458-468.
	CHEN H Y， PENG L， ZHANG J， et al. Characterization of porcine Actinobacillus pleuropneumoniae isolates and screening of vaccine candidate strains［J］. Journal of Sichuan Agricultural University， 2025， 43（2）： 458-468. （in Chinese）

血清型 Serotypes	引物 Primers	引物序列 Primer sequences （5′→3′）	产物大小 Product size/bp	目的基因 Target genes
1	AP1F	CTGGAGTAATTACGGCGACTATTCC	959	cps1B
1	AP1R	AGGAGAAGCTAGTAGTACTTGCATTTTC	959	cps1B
5	AP5F	AGCCACAAGACCCGAATGGTATAATG	825	cps5B
5	AP5R	CCATCAAATGCAGCTTCAAGGAGC	825	cps5B
7	AP7F	TTGGAATGGATTCATGATTGGGC	601	cps7E
7	AP7R	CGGAAATGGCCTATTGAAAAACG	601	cps7E
15	AP15F	GCAACTTGGAGAACATGGTTAAATCAAG	1 595	cps15B/cps15C
15	AP15R	CAACCCTCCAATGTAAGCGAAGG	1 595	cps15B/cps15C

项目 Items	结果 Results	项目 Items	结果 Results
葡萄糖 Glucose	＋	水杨素 Sulicin	―
果糖 Fructose	＋	甘露醇 Mannitol	＋
蔗糖 Saccharose	＋	山梨醇 Sorbitol	―
木糖 Xylose	＋	硝酸盐还原 Nitrate reduction	＋
蕈糖 Mushroom sugar	―	尿素酶 Urease	＋
棉子糖 Raffinose	―	氧化酶 Oxidase	＋
菊糖 Inulin	―	过氧化氢酶 Catalase	―

抗菌药物类别 Class of antibacterial agents	抗菌药物 Antibacterial agents	抑菌圈直径 Inhibition zone diameter/mm	结果 Results
青霉素类 Penicillins	青霉素 Penicillin（10 units）	6	R
	氨苄西林 Ampicillin （10 μg）	6	R
	哌拉西林 Piperacillin （100 μg）	6	R
氨基糖苷类 Aminoglycosides	阿米卡星 Amikacin （30 μg）	17	S
	卡那霉素 Kanamycin （30 μg）	14	I
	庆大霉素 Gentamicin （30 μg）	15	S
	链霉素 Streptomycin （10 μg）	12	I
喹诺酮类 Quinolones	氧氟沙星 Ofloxacin （5 μg）	34	S
大环内酯类 Macrolides	红霉素 Erythromycin （15 μg）	21	I
酰胺醇类 Chloramphenicols	氟苯尼考 Florfenicol （30 μg）	35	S
四环素类 Tetracyclines	四环素 Tetracycline （30 μg）	18	S
磺胺类 Sulfonamides	磺胺甲噁唑 Sulfamethoxazole （30 μg）	25	S
糖肽类 Glycopeptides	万古霉素 Vancomycin （30 μg）	6	R
头孢菌素类 Cephalosporins	头孢呋辛 Cefuroxime （30 μg）	32	S
	头孢噻肟 Cefotaxime （30 μg）	34	S

剂量 Dose/CFU	死亡率 Mortality/%	半数致死量 LD₅₀/CFU
3.0×10⁶	100（10/10）	7.5×10⁴
3.0×10⁵	90（9/10）
3.0×10⁴	20（2/10）
3.0×10³	0（0/10）