间接ELISA检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体方法的建立

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (1): 202-205.

间接ELISA检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体方法的建立

李富祥¹，杨斌²，常志顺²，王传禹²，姚俊¹，刘艳丽²，李华春^1

(1.云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室，昆明 650224； 2.云南省畜牧兽医科学院养禽与禽病研究所，昆明 650224)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-01-20 发布日期:2010-01-20
通讯作者: 李华春

Development and Application of Indirect ELISA for the Detection of Serum Antibodies against Riemerella anatipestifer in Duck

LI Fu-xiang¹, YANG Bin², CHANG Zhi-shun_^², WANG Chuan-yu², YAO Jun¹, LIU Yan-li², LI Hua-chun^1

（1.Yunnan Tropical and Subtropical Animal Virus Disease Laboratory, Kunming 650224,China; 2.Institute for Poultry Science & Health of Yunnan Animal Science and Veterinary Institute, Kunming 650224, China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-01-20 Published:2010-01-20
Contact: LI Hua-chun

摘要/Abstract

摘要： 应用1型鸭疫里默氏杆菌（云南株）超声粉碎物作为包被抗原，建立检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体的间接ELISA方法。用倍比稀释法确定HRP标记羊抗鸭二抗最佳稀释倍数为1∶3500，并用棋盘测定法确定抗原的最佳包被浓度为2.7 mg/mL，血清最佳稀释倍数为1∶300，阴性血清临界值为0.381；阻断试验结果表明,1型鸭疫里默氏杆菌与其抗血清阻断阳性，与鸭大肠杆菌O78、O132菌株和FJ4型鸭疫里默氏杆菌阻断阴性（无交叉反应）。重复性试验结果表明，该ELISA方法批内变异系数≤0.246，批间变易系数≤0.889。结果表明，该ELISA方法特异性强，重复性好，可用于1型鸭疫里默氏杆菌（云南株）血清抗体的检测。

关键词: 鸭疫里默氏杆菌; ELISA; 血清抗体; ELISA效价

Abstract: Indirect ELISA was developed and applied for detection of serum antibodies against serotype 1(Yunnan strain)Riemerella anatipestifer (RA) in ducks, using ultrasonic RA as the coating antigen. Dilution method shew the optimum HRP-Goat Anti-Duck IgG dilution was 1∶3500, chessboard test shew the optimum coating antigen concentration was 2.7 mg/mL,the optimum dilution of serum samples was 1∶300 and the cut-off value of negative serum was 0.381.The interruption test shew the reactions between antiserum of serotype 1 RA and the coating antigen could be interrupted by specific type 1 RA, but could not be interruped by E.coli serotype O78 and serotype O132 strains(no cross-reaction).Repetition test shew the variant coefficients of the D value within assay and between assays less than 0.246 and 0.889 respectively. An interruption test and repetition test showed that the ELISA assay had good specificity and reproducibility to detect serum antibodies against serotype 1 RA in ducks.

Key words: Riemerella anatipestifer; ELISA; serum antibody; ELISA titer

中图分类号:

TQ925⁺.2

李富祥;杨斌;常志顺;王传禹;姚俊;刘艳丽;李华春. 间接ELISA检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体方法的建立[J]. , 2010, 37(1): 202-205.

LI Fu-xiang;YANG Bin;CHANG Zhi-shun;WANG Chuan-yu;YAO Jun;LIU Yan-li;LI Hua-chun. Development and Application of Indirect ELISA for the Detection of Serum Antibodies against Riemerella anatipestifer in Duck[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2010, 37(1): 202-205.

[1]	张翩, 陈晶, 张晓晓, 麦小鹏, 唐科, 向华, 王刚, 罗胜军, 马惠海, 袁子国, 王晓虎. 弓形虫GRA1蛋白表达及间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(7): 3308-3320.
[2]	宋幸辉, 杨朋坤, 董轩志, 陈高坤, 杨贝贝, 蔡怡琳, 刘健, 吕慧芳, 赵丽, 张晓战. 鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌与鸭圆环病毒混合感染的诊治及病原分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(6): 2935-2945.
[3]	钟玮霖, 尧建辉, 魏晓琪, 颜广智, 陈盛楠, 刘明杰, 黄良宗. 广东某规模化猪场PCV2d感染的诊断与遗传进化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(6): 2781-2789.
[4]	潘向英, 曾智勇, 梁海英, 汤德元, 王彬, 叶泥, 田红利, 边孟婷, 柳佳佳, 黄书. 猪轮状病毒VP6蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(3): 1231-1240.
[5]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 翟佳佳, 张杰. 猪圆环病毒3型四川株Cap蛋白的截短表达及其抗体间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(7): 3056-3066.
[6]	陈亦杏, 张美琳, 李仕楷, 杨智灿, 李宛珈, 陈济铛, 朱婉君, 张济培. 广东部分地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定和耐药性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(7): 3185-3194.
[7]	高乐, 司朵朵, 郭磊, 陈灿, 王玮, 王健霖, 王玲玲, 李继东. 滑液囊支原体GA组件蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(6): 2621-2632.
[8]	张晓战, 邢忠玉, 吕楠楠, 董轩志, 李育林, 毛天绩, 梁尧涵, 郭运泽, 宋予震, 乔宏兴, 边传周, 袁野, 梁群超. 小鹅瘟病毒、鹅星状病毒Ⅰ型与鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊断及病原分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(3): 1183-1193.
[9]	任建乐, 林铱婷, 姬康, 谭姗姗, 陈新新, 晋怡, 王颖, 牛胜, 梁立滨, 李俊平, 赵宇军, 田文霞. A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(2): 678-688.
[10]	杨大为, 刘书怡, 蔺雅婷, 陈虎, 张洪亮, 李桂梅. 猪伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5439-5448.
[11]	张宜宸, 孙明军, 邓昌顺, 丁家波, 徐宝梁, 陈磊, 全春兰, 赵康, 范学政, 秦彤. 基于重组E2蛋白的牛病毒性腹泻病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与评价[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5459-5469.
[12]	戴婷婷, 刘荣昌, 陈海玉, 庄丽云, 韦玉帆, 谭慧敏, 刘洋, 唐福川, 黄瑜, 程艳青, 包银莉, 郑新添. 1株血清2型鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定、致病性研究及灭活疫苗制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5499-5506.
[13]	武上杰, 李佳佳, 蒋琳, 马月辉, 丁家波, 何晓红. 基于cELISA检测的绵羊抗布鲁氏菌病性状全基因组关联分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4191-4199.
[14]	徐浩钧, 刘颖, 梅晨, 徐彤, 利凯, 王宏俊. 基于外膜蛋白的鼻气管鸟杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4420-4428.
[15]	王程, 夏应菊, 王海东, 刘业兵. 非洲猪瘟病毒P54蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4440-4449.