基于甲病毒复制子的犬瘟热核酸疫苗的构建及表达性研究

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (9): 96-100.

基于甲病毒复制子的犬瘟热核酸疫苗的构建及表达性研究

孙建涛^1,2, 侯绍华², 于萍^2,3, 朱鸿飞², 梁欠², 郝志明¹

1. 天津农学院动物科学系, 天津 300384;
2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193;
3. 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所, 甘肃兰州 730050

收稿日期:2013-01-31 出版日期:2013-09-20 发布日期:2013-09-18
通讯作者: 郝志明 E-mail:haozhimingg@sina.com
作者简介:孙建涛(1984-),男,山东人,硕士生,研究方向:预防兽医学。
基金资助:
农业部动物疫情监测与防治项目;863动物疫病分子诊断技术研究与产品创制项目(2012AA101302);国家科技支撑计划重点项目(2010BAD04B02);公益性行业(农业)科研专项经费项目(200903027)。

Study on the Construction and Expression Characteristics of Canine Distemper DNA Vaccine Based on SFV-replicon

SUN Jian-tao^1,2, HOU Shao-hua², YU Ping^2,3, ZHU Hong-fei², LIANG Qian², HAO Zhi-ming¹

1. Department of Animal Science, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China;
2. Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;
3. Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730050, China

Received:2013-01-31 Online:2013-09-20 Published:2013-09-18

摘要/Abstract

摘要： 本试验利用T-A克隆技术,构建克隆载体pEASY-Blunt-F,BamHⅠ酶切pEASY-Blunt-F,回收F基因,将其克隆至pSCA1真核表达载体中,获得重组质粒pSCA1-F。经DNA测序、限制性内切酶分析和PCR鉴定,结果表明重组质粒pSCA1-F成功构建。通过间接免疫荧光试验和Western blotting证实F基因在转染细胞中表达。此外,细胞凋亡的检测结果表明,pSCA1-F能引起转染的细胞发生凋亡。

关键词: 核酸疫苗; 犬瘟热病毒; F基因; 甲病毒复制子; 细胞凋亡

Abstract: The clone vector pEASY-Blunt-F with fusion gene of canine distemper virus(CDV) isolated from vaccine strain was successfully constructed by T-A clone technique and was digested with restriction enzyme of BamHⅠ. The F gene was cloned into eukaryotic expression vector pSCA1. Finally a recombinant plasmid named pSCA1-F was constructed and identified by PCR, restriction enzyme analysis and sequencing. pSCA1-F was transfected into BHK-21 cells by using X-tremeGENE 9 DNA Transfection Reagent,IFA and Western blotting were performed to detect F expressions,the results showed that F gene had expressed in the transfected cells.Furthermore,apoptosis assay confirmed that pSCA1-F could induce the transfected cells apoptosis.

Key words: DNA vaccine; canine distemper virus; F gene; SFV-replicon; apoptosis

中图分类号:

Q786

孙建涛, 侯绍华, 于萍, 朱鸿飞, 梁欠, 郝志明. 基于甲病毒复制子的犬瘟热核酸疫苗的构建及表达性研究[J]. , 2013, 40(9): 96-100.

SUN Jian-tao, HOU Shao-hua, YU Ping, ZHU Hong-fei, LIANG Qian, HAO Zhi-ming. Study on the Construction and Expression Characteristics of Canine Distemper DNA Vaccine Based on SFV-replicon[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2013, 40(9): 96-100.

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