金黄色葡萄球菌FnbpA、ClfA、Ebps抗原表位的串联表达及多克隆抗体的制备

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (5): 97-100.

金黄色葡萄球菌FnbpA、ClfA、Ebps抗原表位的串联表达及多克隆抗体的制备

高翔, 许会会, 雷连成

吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春 130062

收稿日期:2010-10-03 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-05-20 发布日期:2011-05-20
通讯作者: 雷连成。

Tandem Expression of FnbpA,ClfA,Ebps Antigen Epitopes of Staphylococcus aureus and the Preparation of the Polyclonal Antibody

GAO Xiang, XU Hui-hui, LEI Lian-cheng

College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun 130062,China

Received:2010-10-03 Revised:1900-01-01 Online:2011-05-20 Published:2011-05-20

摘要/Abstract

摘要： 为获得金黄色葡萄球菌特异性抗原蛋白并以此制备多克隆抗体,应用DNAStar软件筛选金黄色葡萄球菌FnbpA、ClfA、Ebps的抗原表位,以柔性氨基酸序列连接后进行全基因合成,将目的基因克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态细胞,诱导表达,采用Sepharose 4B柱亲和层析纯化表达蛋白,制备抗原后对家兔进行皮下多点注射,于第42天采集外周血,获得血清。结果表明,本试验成功构建了金黄色葡萄球菌抗原基因表达载体,并获得了高免血清,经ELISA的方法检测血清效价可达到1∶10000以上,成功制备多克隆抗体,为以后采用免疫学方法快速检测金黄色葡萄球菌奠定了基础。

关键词: 金黄色葡萄球菌; 抗原表位; 串联表达; 多克隆抗体

Abstract: In order to achieve the special antigen protein and prepare polyclonal antibody,so as to lay the foundation of the rapid detection of Staphylococcus aureus,this experiment screened the antigen epitopes of FnbpA,ClfA,Ebps of Staphylococcus aureus using the DNAStar software,then connected the epitopes with a linker and synthesized the whole genes. The objective gene was cloned into expression vector pGEX-4T-1,followed by transformation into E.coli BL21. The expression production was purified through Sepharose 4B affinity chromatography method,and the purified protein was injected into rabbits to prepare polyclonal antibody,at the 42 days peripheral blood was collected and the serum was obtained. The results revealed that this experiment has successfully established the expression vector,and the antibody titer was more than 1∶10000 analysised by ELISA. These results were benefit to develop the rapid detection of Staphylococcus aureus using immunological methods.

Key words: Staphylococcus aureus; antigen epitopes; tandem expression; polyclonal antibody

中图分类号:

高翔;许会会;雷连成. 金黄色葡萄球菌FnbpA、ClfA、Ebps抗原表位的串联表达及多克隆抗体的制备[J]. , 2011, 38(5): 97-100.

GAO Xiang;XU Hui-hui;LEI Lian-cheng. Tandem Expression of FnbpA,ClfA,Ebps Antigen Epitopes of Staphylococcus aureus and the Preparation of the Polyclonal Antibody[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2011, 38(5): 97-100.

[1]	孟昭英, 靳换, 涂敏, 胡格, 章振华. 鸡补体受体Ⅱ蛋白兔多克隆抗体制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(6): 2772-2780.
[2]	李托, 杜媛媛, 屈雷, 李陇平. 奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌特异性噬菌体的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(6): 2800-2808.
[3]	刘丹丹, 罗洁, 高函雅, 徐李依娜, 郝宝山, 王馨, 张伟. 雪白睡莲花粗多糖提取工艺优化及其对金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎的治疗效果研究[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(6): 2818-2829.
[4]	刘敏, 程淮, 郑珍珍, 张梦思, 张贺伟, 任静强. 犬副流感病毒N蛋白的真核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2287-2294.
[5]	司维, 谭茜宇, 徐玲芸, 罗廷荣, 李晓宁, 顾金燕. H3N2亚型猪流感病毒HA1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(4): 1739-1749.
[6]	洪嘉俊, 肖金华, 张政, 杨雨婷, 方春, 韩旭. sod基因缺失对单增李斯特菌10403S抗氧化应激作用的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(4): 1776-1783.
[7]	邢国锋, 党乙凡, 赵耀, 苏帆帆, 吴自豪, 李涛. 唾液乳杆菌无细胞上清液对金黄色葡萄球菌溶血活性的抑制作用研究[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(4): 1884-1894.
[8]	李扬, 徐晶晶, 张小玉, 李娜娜, 余星雨, 冷青文, 李彦芳, 屈勇刚. 新疆某规模化奶牛场乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定、耐药分析及毒力基因检测[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(3): 1370-1382.
[9]	王小格, 司煊瑛, 闫志伟, 王飞, 尤龙琪, 刘梗, 蔡茂, 梁珺珹, 梁玉秀, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 781-791.
[10]	郭晨云, 宋金星, 王梦翔, 孙俊如, 闫若潜, 谢彩华, 吴亚楠, 张改平. 非洲猪瘟病毒B602L蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(9): 3980-3989.
[11]	崔艳艳, 王冠, 郝俊芳, 李志强, 余复昌, 史柯, 席丽, 齐萌. 嗜吞噬细胞无浆体MSP4蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(9): 4036-4042.
[12]	何兴丽, 周佩瑶, 张小雪, 牟泉宙, 李杨, 王昭元, 刘鹏, 王梓, 宋杨阳, 李晓琳, 沈冰蕾. 金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对奶牛中性粒细胞炎性因子分泌的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(8): 3676-3686.
[13]	向勇, 李林林, 张俊勤, 董嘉文, 黄允真, 翟颀, 徐志宏, 廖明, 孙敏华. 基因1型鹅星状病毒VP27蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(6): 2576-2584.
[14]	黄鑫淼, 姚敏, 何豪, 肖惠萍, 陈婧卓, 凤昊, 张坜, 郑孙莉, 张梦蝶, 黄廷华. 鼠伤寒沙门菌毒力蛋白SptP多克隆抗体的制备及应用[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(6): 2597-2604.
[15]	蔡畅, 陈赫威, 宋瑞鹏, 覃绍敏, 刘金凤, 秦树英, 孙倩, 陈童锦悦, 欧长波, 刘兴友, 马玲, 吴健敏. 新型阿卡斑病毒NSs蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(5): 2015-2026.