抗菌肽Shiva1a基因真核表达载体的构建及序列分析

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (12): 96-99.

抗菌肽Shiva1a基因真核表达载体的构建及序列分析

宫晓炜, 郑福英, 蔺国珍, 曹小安, 王光华, 周继章, 才学鹏

中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 农业部兽医公共卫生重点开放实验室,甘肃兰州 730046

收稿日期:2011-04-16 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-12-20 发布日期:2011-12-20
通讯作者: 周继章, 才学鹏

Construction of Eukaryotic Expression Vector and Sequence Analysis of Antimicrobial Peptide Gene Shiva 1a

GONG Xiao-wei, ZHENG Fu-ying, LIN Guo-zhen, CAO Xiao-an, WANG Guang-hua, ZHOU Ji-zhang, CAI Xue-peng 

State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Key Laboratory of Veterinary Public Health of the Ministry of Agriculture,Lanzhou Veterinary Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046, China

Received:2011-04-16 Revised:1900-01-01 Online:2011-12-20 Published:2011-12-20

摘要/Abstract

摘要： 为了探讨天蚕类抗菌肽在动物早期抗感染过程中的作用机理,本研究以Shiva 1a基因的成熟肽为模板设计4条引物,利用重叠延伸PCR技术获得目的基因,并在C端添加6×His的标签。将此序列与真核表达载体pIRES₂-EGFP进行重组,构建pIRES₂-EGFP-Shiva 1a重组表达质粒,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,采用阳离子脂质体转染将重组质粒转染到CHO-K1细胞,荧光显微镜观察其表达情况。通过生物信息学软件对抗菌肽Shiva 1a的二级结构和三级结构进行预测分析。其结果为进一步研究Shiva 1a的抗菌活性和在动物抗病育种方面的应用奠定了基础。

关键词: 抗菌肽; Shiva 1a; 真核表达; 序列分析

Abstract: To explore the effect mechanism of cecropin-class lytic peptide at early stage of infection. The mat peptide of Shiva 1a was amplified by overlap extension PCR and the C-terminus contained 6×His-marker. The gene sequence were recombinant with eukaryotic expression vector pIRES₂-EGFP. After being identified by restriction enzyme digestion and sequencing, the recombinant plasmid pIRES₂-EGFP-Shiva 1a was transfected into CHO-K1 cells by liposomes. The expression of the the recombinant plasmid pIRES₂-EGFP-Shiva 1a was observed by fluorescence microscope. At the same time, the secondary structure and 3D structure were predicted by bioinformatics tools. The results lay the foundation in research of antimicrobial activities and applications of the antimicrobial peptide Shiva 1a in breeding for disease resistance of animals.

Key words: antimicrobial peptide; Shiva 1a; eukaryotic expression; sequence analysis

中图分类号:

宫晓炜;郑福英;蔺国珍;曹小安;王光华;周继章;才学鹏. 抗菌肽Shiva1a基因真核表达载体的构建及序列分析[J]. , 2011, 38(12): 96-99.

GONG Xiao-wei;ZHENG Fu-ying;LIN Guo-zhen;CAO Xiao-an;WANG Guang-hua;ZHOU Ji-zhang;CAI Xue-peng . Construction of Eukaryotic Expression Vector and Sequence Analysis of Antimicrobial Peptide Gene Shiva 1a[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2011, 38(12): 96-99.

[1]	杨彦, 胡雁鸣, 丁健, 李犇, 何雨桐, 刘雪薇, 王佳文, 兰卓, 邱鸿宇, 高俊峰, 王春仁. 蟾蜍棒线虫线粒体全基因组特征分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(7): 3190-3201.
[2]	梁丽娜, 支岩, 乌云格日乐, 胡格. 抗菌肽的性质、功能及优化策略研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(7): 3359-3371.
[3]	闪金研, 连凯琪, 马峻, 刘玉玲, 聂竹兰, 李斌顺, 彭仁海, 魏杰. 淇河鲫Runx2b基因克隆、序列分析及时空表达[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(6): 2717-2728.
[4]	魏黄思梧, 张兴艺, 黄校花, 刘昌锦, 武文杰, 沈政乔, 罗锋, 邓舜洲. 猪轮状病毒VP6蛋白的真核表达及单克隆抗体制备和应用[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(6): 2750-2761.
[5]	李天秀, 李昕鹏, 董新星, 兰国湘, 严达伟, 朱家位. 丽江猪HMOX2基因扩增、序列分析及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2219-2231.
[6]	刘敏, 程淮, 郑珍珍, 张梦思, 张贺伟, 任静强. 犬副流感病毒N蛋白的真核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2287-2294.
[7]	黎小银, 刘萌, 武新学, 罗璠, 高彦华. β-防御素yTAP对小鼠肠道形态及菌群多样性的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2379-2391.
[8]	韩晋辉, 翟培, 吕文平. 单点氨基酸替换对杂合肽KL-21生物活性的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2400-2408.
[9]	雷志刚, 潘宏, 张丹丹, 刘权辉, 孙哲, 邓珊, 黄奔. 马山黑山羊MAPK8基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体构建[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 534-544.
[10]	郭佳佳, 聂晶, 曲久, 旦增占都, 李小伟, 江明锋, 刘益丽. 抗菌肽抑菌作用机制及在畜禽中的应用[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 934-945.
[11]	周玲玲, 王宇航, 李亦菲, 柴永乐, 张明亮, 张元臣, 连凯琪. 抗菌肽LL-1的鉴定和生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(1): 491-497.
[12]	冉扬, 邱洁, 申小云. 湖羊对天蚕素抗菌肽的响应[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(8): 3385-3393.
[13]	张学迪, 徐楷, 尹硕, 刘晶, 王仲浩, 秦建华, 吴鹏远, 王传文. 鸡皮刺螨羧酸酯酶2基因克隆、序列分析及其表达特征研究[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(7): 2973-2983.
[14]	黄丽清, 段安琴, 郑海英, 杨春艳, 尚江华. 水牛SFRP1基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(5): 1807-1818.
[15]	邹菊红, 莫智化, 刘雨帆, 邹剑伟, 卢俊, 何海恩, 王璠, 黄艳娜, 蒋钦杨. 努比亚山羊Rheb基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体构建[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(5): 1819-1826.