沼泽型水牛卵泡抑素基因的真核表达研究

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (9): 57-60.

沼泽型水牛卵泡抑素基因的真核表达研究

邓继贤¹, 杨秀荣², 韦英明², 蒋和生^1,2

1. 广西科学院中国东盟(广西)生物技术合作研发中心,广西南宁 530003;2. 广西大学动物科技学院,广西南宁 530005

收稿日期:2011-03-02 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-09-20 发布日期:2011-09-20
通讯作者: 蒋和生

Eukaryotic Expression of Swamp Buffalo Follistatin

DENG Ji-xian¹, YANG Xiu-rong², WEI Ying-ming², JIANG He-sheng^1,2

1. China-ASEAN (Guangxi) Biotechnology Cooperative Center, Guangxi Academy of Sciences, Nanning 530003, China;2. College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530005, China

Received:2011-03-02 Revised:1900-01-01 Online:2011-09-20 Published:2011-09-20

摘要/Abstract

摘要： 试验通过候选基因法,选定卵泡抑素(follistatin,FS)作为影响水牛繁殖性能的主要候选基因,通过基因工程的方法,用XhoⅠ、SacⅡ双酶切广西大学动物遗传育种与繁殖实验室克隆的添加有ACC的Kozaka 序列的pMD-bFS质粒和pEGFP-N₁,构建pEGFP-bFS真核表达质粒,将其与阳离子脂质体混匀后,分别转染体外培养的水牛胎儿成纤维(BFF)细胞和仓鼠肾(BHK)细胞系,经过48 h培养后,在相差荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达水平,用RT-PCR和Western blotting方法对转入质粒表达进行定性鉴定。结果显示,本研究成功构建了添加有ACC的Kozaka 序列的pEGFP-bFS真核表达质粒,该重组质粒在BFF和HBK两种细胞均表达,但在HBK细胞系的表达量稍高。本研究结果将为下一步制备具有生物活性的bFS工程疫苗,研究bFS对水牛繁殖性能的影响提供参考。

关键词: 沼泽型水牛; 卵泡抑素; 真核表达; 繁殖性能

Abstract: In this study,follistatin gene was chosen as the candidate gene affecting the reproductive ability in buffalo. Recombinant plasmid pEGFP-bFS was conducted and expressed in both buffalo fetal fibroblast (BFF) and BHK cells. pMD-bFS and pEGFP-N₁ were digested with XhoⅠ,Sac Ⅱ,then eukaryotic expression vector-pEGFP-bFS was constructed. Buffalo fetal fibroblast and BHK cells were cultured with pEGFP-bFS intermixing Lipofectamine^TM 2000 in carbon dioxide incubator with 37 ℃,5% CO₂,100% humidity. After 24 h,expression levels of recombinant vector were verified through observing directly under phase contrast fluorescence microscope,RT-PCR and Western blotting. The results indicated that bFST expressed in both buffalo fibroblast and BHK cells. This study was a very significance to produce bioactive bFS engineered plasmid and research effects of bFS on reproductive ability.

Key words: swamp buffalo; follistatin; eukaryotic expression; reproductive ability

中图分类号:

S823.8⁺3

邓继贤;杨秀荣;韦英明;蒋和生;. 沼泽型水牛卵泡抑素基因的真核表达研究[J]. , 2011, 38(9): 57-60.

DENG Ji-xian;YANG Xiu-rong;WEI Ying-ming;JIANG He-sheng;. Eukaryotic Expression of Swamp Buffalo Follistatin[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2011, 38(9): 57-60.

[1]	尚恺圆, 官久强, 安添午, 赵洪文, 柏琴, 张明, 吴伟生, 李华德, 沙泉, 江明锋, 张翔飞, 罗晓林. 基于转录组学解析围产期营养调控对牦牛母体营养代谢与繁殖的影响机制[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(7): 3031-3046.
[2]	魏黄思梧, 张兴艺, 黄校花, 刘昌锦, 武文杰, 沈政乔, 罗锋, 邓舜洲. 猪轮状病毒VP6蛋白的真核表达及单克隆抗体制备和应用[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(6): 2750-2761.
[3]	刘敏, 程淮, 郑珍珍, 张梦思, 张贺伟, 任静强. 犬副流感病毒N蛋白的真核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2287-2294.
[4]	陶思名, 梁慧, 颜畅, 龙润泽, 徐睿卿, 李子胥, 吴英杰, 刘宁, 秦应和. 饲粮中添加绿原酸对母兔繁殖性能及其仔兔生长性能的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(3): 1080-1088.
[5]	雷志刚, 潘宏, 张丹丹, 刘权辉, 孙哲, 邓珊, 黄奔. 马山黑山羊MAPK8基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体构建[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 534-544.
[6]	黄丽清, 段安琴, 郑海英, 杨春艳, 尚江华. 水牛SFRP1基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(5): 1807-1818.
[7]	邹菊红, 莫智化, 刘雨帆, 邹剑伟, 卢俊, 何海恩, 王璠, 黄艳娜, 蒋钦杨. 努比亚山羊Rheb基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体构建[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(5): 1819-1826.
[8]	潘诗雨, 尹娜, 王佳兴, 王强州, 陈世豪, 白皓, 常国斌. 鸡DCAF1生物信息学分析及对J亚群禽白血病病毒复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(5): 1837-1845.
[9]	王开开, 赵懿侔, 张含露, 邱实, 刘艺佳, 张文鑫, 杨丰利. 猫球形马拉色菌脂肪酶SMG1基因的真核表达及重组载体脂肪酶活性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(5): 2037-2046.
[10]	卿玉波, 程雯, 角德灵, 刘城, 郝志强, 郭建雄, 李钰莹, 张筱琳, 李臻, 李效宇, 王文, 魏红江. 体细胞克隆技术扩繁超细型二狼山绒山羊的应用研究[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(4): 1420-1427.
[11]	陈扬, 项燕华, 李宜海, 何秀苗. 鸡Caspase 3基因的克隆表达、酶活性及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4200-4210.
[12]	王茂晗, 苏咏梅, 朱文进, 陈亮, 倪慧勇, 逯春香, 王茂森, 石峰, 赵晨坤. 不同产驹数阳原驴血液转录组分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4391-4399.
[13]	马梦瑶, 贾鑫浩, 刘航, 钱梦薇, 郑兰兰. 猪NLRC5的真核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(10): 4550-4558.
[14]	潘鹏丞, 雷宗全, 李显, 胡湘云, 秦谦涛, 覃兆鲜, 关志惠, 陈宝剑, 谢炳坤. 陆川猪MYL2基因生物信息学分析、真核表达载体构建及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1796-1806.
[15]	邢天琦, 许迪, 颜港, 王钰滨, 王梦影, 梁晶, 兰干球. 巴马小型猪ABCD4基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(11): 4338-4348.